治疗癌症的方法与流程-j9九游会真人

1.本发明涉及包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联(heterotandem)双环肽复合物或其医药学上可接受的盐与免疫肿瘤学药剂组合用于治疗癌症的用途。本发明还提供医药学上可接受的组合物，其包含杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐，所述杂串联双环肽复合物包含一个或多个cd137结合性肽配体。


背景技术：

2.环肽能够以高亲和力和靶标特异性结合蛋白质靶标，且因此成为用于研发治疗剂的引人注目的分子类别。实际上，一些环肽已成功用于临床中，所述环肽如例如抗细菌肽万古霉素、免疫抑制剂药物环孢菌素或抗癌药奥曲肽(driggers等人(2008)，nat rev drug discov 7(7),608-24)。良好的结合特性是由在肽与靶标之间形成的相对较大的相互作用表面以及环状结构降低的构象灵活性产生的。通常，大环化物结合于数百平方埃的表面，如例如环肽cxcr4拮抗剂cvx15(wu等人(2007)，science 330，1066-71)、具有结合于整合素αvb3的arg-gly-asp基序的环肽(xiong等人(2002)，science 296(5565)，151-5)或结合于尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子的环肽抑制剂upain-1(zhao等人(2007),j struct biol 160(1),1-10)。
3.由于其环状构型，肽大环比线性肽的灵活性更低，从而在结合于靶标时引起较小的熵损失且产生较高的结合亲和力。降低的灵活性还导致锁定靶标特异性构型，从而与线性肽相比增加结合特异性。此效应已经由基质金属蛋白酶8(mmp-8)的强效选择性抑制剂来例证，该基质金属蛋白酶8(mmp-8)在其环打开时失去其对其他mmp的选择性(cherney等人(1998),j med chem 41(11),1749-51)。经由大环化实现的有利结合特性在具有超过一个肽环的多环肽中(如例如在万古霉素、乳酸链球菌素(nisin)和放线菌素(actinomycin)中)甚至更加明显。
4.不同研究小组先前已将具有半胱氨酸残基的多肽留至合成分子结构(kemp和mcnamara(1985),j.org.chem；timmerman等人(2005),chembiochem)。meloen及同事已使用三(溴甲基)苯及相关分子以将多个肽环快速且定量环化到用于蛋白质表面的结构模拟的合成骨架上(timmerman等人(2005)，chembiochem)。用于产生候选药物化合物的方法在wo2004/077062和wo2006/078161中公开，其中所述化合物经由使含有半胱氨酸的多肽连接至如例如三(溴甲基)苯的分子骨架来产生。
5.已研发出基于噬菌体展示的组合方法来为所关注靶标产生且筛选大型双环肽文库(heinis等人(2009)，nat chem biol 5(7),502-7和wo 2009/098450)。简言之，含有三个半胱氨酸残基和两个六随机氨基酸区(cys-(xaa)
6-cys-(xaa)
6-cys)的组合线性肽文库显展示在噬菌体上，并且通过使半胱氨酸侧链共价连接至小分子(三-(溴甲基)苯)而经环化。


技术实现要素：

6.现已发现，包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐引起肿瘤浸润性免疫细胞和免疫反应的显著增加。参见例如，实施例1中的转录分析表明在bcy12491和bt7480中的每一个的治疗后关于一些t细胞趋化性趋化因子/细胞因子的免疫细胞评分和mrna的显著增加。因此，在一个方面中，本发明提供一种用于增加癌症患者中的免疫反应的方法，其包括向该患者施用治疗有效量的包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐。
7.还已经发现，与单一药剂治疗中的每一个相比，包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐与免疫肿瘤学药剂的组合显著改善抗肿瘤活性。参见例如，与用各单一药剂进行治疗相比，实施例2中的bcy12491与pd-1拮抗剂帕博利珠单抗(pembrolizumab)的组合疗法导致更显著的抗肿瘤活性。因此，在一个方面中，本发明提供一种用于治疗患者的癌症的方法，其包括向该患者施用包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐和免疫肿瘤学药剂。
附图说明
8.图1描绘bcy12491调节肿瘤免疫微环境并且驱动t细胞浸润。(a)携带mc38肿瘤的小鼠用媒介物、15mg/kg epha2/cd137杂串联双环肽复合物(bcy12491)、对映体非结合对照杂串联双环肽复合物(bcy13626)q3d静脉内(i.v.)或2mg/kgαcd137 q3d腹膜内(i.p.)进行治疗。个体肿瘤体积(针对治疗开始当天的肿瘤体积标准化)按治疗进行分组显示。(b)肿瘤的nanostring分析显示bcy12491和αcd137对t细胞(探针集：cd3d、cd3e、cd3g、cd6、sh2d1a和trat1)、细胞毒性细胞(探针集：ctsw、gzma、gzmb、klrb1、klrd1、klrk1、nkg7和prf1)和巨噬细胞(探针集：cd163、cd68、cd84和ms4a4a)含量的影响。(c)肿瘤的nanostring分析显示bcy12491和αcd137对检查点抑制剂pdcd1(蛋白pd-1)、cd274(蛋白pd-l1)和ctla4(蛋白ctla-4)转录的影响。(d)显示来自用媒介物、15mg/kg bcy12491、bcy13626或2mg/kgαcd137 q3d治疗且对小鼠cd8进行染色的肿瘤的组织切片的代表性图像。(b和c)*＜0.05，***p＜0.001，单向anova与dunnett后检验(dunnett's post test)。
9.图2描绘bt7480对所选细胞因子/趋化因子的影响。(a)在曲线图的左手侧，显示在bt7480治疗之后mc38#13肿瘤组织中的5种不同细胞因子/趋化因子mrna的标准化线性计数数据。(b)细胞毒性细胞评分以及ccl1、ccl-17和ccl24标准化rna计数的重叠图显示这些细胞因子/趋化因子转录物的早期增加，随后为细胞毒性细胞评分的增加。
10.图3描绘bt7480调节肿瘤免疫微环境且驱动cd8 t细胞浸润。携带mc38#13肿瘤的小鼠用媒介物、5mg/kg(0h、24h)的bt7480或非结合杂串联双环肽复合物对照bcy12797(nb-bcy)静脉内或2mg/kgαcd137腹膜内进行治疗。肿瘤的nanostring分析显示bt7480和αcd137随时间推移对肿瘤组织中的(a)巨噬细胞(探针集：cd163、cd68、cd84和ms4a4a)和(b)细胞毒性细胞(探针集：ctsw、gzma、gzmb、klrb1、klrd1、klrk1、nkg7和prf1)评分的影响。(c)细胞毒性细胞评分和巨噬细胞细胞评分的重叠图证明巨噬细胞细胞评分的早期增加，随后为细胞毒性细胞评分的增加。(a和b)*＜0.05，**p＜0.01，单向anova与dunnett后检验。
11.图4描绘bt7480导致一些免疫检查点mrna的增加。携带mc38#13肿瘤的小鼠用媒介物、5mg/kg(0h、24h)的bt7480或非结合杂串联双环肽复合物对照bcy12797(nb-bcy)静脉内
或2mg/kgαcd137腹膜内进行治疗。肿瘤的nanostring分析显示bt7480和αcd137对一些免疫检查点mrna的水平的影响。*＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，单向anova与dunnett后检验。
12.图5描绘自第0天(在治疗开始之后)起的bcy12491 帕博利珠单抗组合到第22天产生100％完全响应率。携带mc38肿瘤的小鼠用媒介物、5mg/kg bcy12491 qw(0、24h)、3mg/kg帕博利珠单抗qw或其组合进行治疗。顶部图显示自治疗开始至第28天的平均肿瘤体积。单药疗法和组合治疗两者均显著影响肿瘤生长(***p＜0.0001，混合效应分析与dunnett后检验，在d18与媒介物进行比较)。此外，组合治疗比单药疗法中的任一者更加有效(***p＜0.0001，混合效应分析与dunnett后检验，在d20将组合与单药疗法进行比较)，从而到第22天引起所有经治疗动物中的完全响应。右侧曲线展示来自治疗群体的个体肿瘤的生长曲线。
13.图6描绘bcy12491 帕博利珠单抗组合在不同给药顺序的情况下产生显著的抗肿瘤活性。携带mc38肿瘤的小鼠用以下三种不同给药时间方案用媒介物、5mg/kg bcy12491 qw(0、24h)、3mg/kg帕博利珠单抗qw或其组合进行治疗：bcy12491和帕博利珠单抗治疗均在第0天开始；bcy12491治疗在第0天开始，随后帕博利珠单抗治疗在第5天开始；或帕博利珠单抗治疗在第0天开始，随后bcy12491治疗在第5天开始。顶部图显示从治疗开始到第28天的平均肿瘤体积。所有组合治疗均显示出显著的抗肿瘤活性，其中到第42天，10/10(自d0起的bcy12491 帕博利珠单抗)、9/10(自d0起的bcy12491 自d5起的帕博利珠单抗)和8/10(自d0起的帕博利珠单抗和自d5起的bcy12491)完全响应。***p＜0.0001，混合效应分析与dunnett后检验，在d18与媒介物进行比较。右侧曲线显示来自治疗群体的个体肿瘤的生长曲线。
14.图7描绘将bcy11864添加至抗pd-1单药疗法显著[p＝0.004，对数秩(mantel-cox)检验，比较抗pd-1和抗pd-1 bcy11864组合组]增加携带ct26#7(ct26经工程改造以过表达柄蛋白-4(nectin-4))的小鼠的存活期(定义为达到人道终点，肿瘤体积＞2000mm3)。
[0015]
图8描绘将bt7480添加至抗pd-1单药疗法增加携带mc38#13(mc38经工程改造以过表达柄蛋白-4)的小鼠中的完全响应(cr)率。
[0016]
图9描绘将bt7480添加至抗ctla-4单药疗法显著[p＝0.0499，对数秩(mantel-cox)检验，比较抗ctla-4和抗ctla-4 bt7480组合组]增加携带mc38#13(mc38经工程改造以过表达柄蛋白-4)的小鼠的存活期(定义为达到人道终点，肿瘤体积＞2000mm3)且增加完全响应率。
[0017]
图10描绘bt7455引起一些免疫检查点mrna的增加。携带mc38肿瘤的小鼠静脉内用媒介物、8mg/kg(0h、24h)的bt7455或腹膜内用2mg/kg抗cd137抗体或10mg/kg抗pd-1抗体进行治疗。肿瘤的nanostring分析显示治疗对一些免疫检查点mrna的水平的影响。显示mc38肿瘤组织中的mrna在24小时、48小时和144小时时间点处的标准化log2计数。*＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，单向anova与dunnett后检验，比较在相同时间点的治疗剂与媒介物。
[0018]
图11描绘bt7455(8mg/kg)、抗pd-1和抗cd137(乌瑞芦单抗(urelumab)类似物)治疗跨越24小时、48小时和24小时时间点对5种所选细胞因子/趋化因子的影响。显示mc38肿瘤组织中的mrna在24小时、48小时和144小时时间点处的标准化log2计数。*p＜0.05，**p＜0.01，****p＜0.0001，0.01单向anova与dunnett后检验。
[0019]
图12描绘bt7455(8mg/kg)、抗pd-1和抗cd137(乌瑞芦单抗类似物)治疗对细胞毒性细胞的影响。治疗在24小时、48小时和144小时时间点处对细胞毒性细胞的影响显示为细胞毒性细胞类型评分，细胞毒性细胞类型评分作为mc38肿瘤组织中的标准化log2(平均值与标准偏差)评分。(*p＜0.05，单向anova与dunnett后检验，将治疗剂与媒介物进行比较)。
[0020]
图13描绘转录分析表明bt7455在治疗开始之后的早期时间点(48h)处对一些基因集的显著调节(*p＜0.05，**p＜0.01，单向anova与dunnett后检验)，而抗pd-1和乌瑞芦单抗类似物(抗cd137)的作用并不显著。治疗对基因集的作用显示为mc38肿瘤组织中的signature评分(signature score)(平均值与标准偏差)。
具体实施方式
[0021]
1.本发明的某些实施方案的描述：
[0022]
已发现，与单一药剂治疗中的每一种相比，包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐引起肿瘤浸润性免疫细胞和免疫反应的显著增加，且包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐与免疫肿瘤学药剂的组合显著改善抗肿瘤活性。参见例如实施例1中用bcy12491和bt7480中的每一种进行治疗的数据，以及实施例2中用单独的bcy12491、单独的pd-1拮抗剂帕博利珠单抗和bcy12491与帕博利珠单抗的组合进行治疗的数据。因此，在一个方面中，本文中提供一种包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐用于增加癌症患者中的免疫反应的方法或用途。在另一方面中，本文中提供一种包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐与免疫肿瘤学药剂的组合用于治疗患者的癌症的方法或用途。
[0023]
在一些实施方案中，本发明提供一种用于增加癌症患者中的免疫反应的方法，其包括向患者施用治疗有效量的包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供一种包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐在制备用于增加癌症患者中的免疫反应的药物中的用途。
[0024]
在一些实施方案中，本发明提供一种用于治疗患者的癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐和免疫肿瘤学药剂。在一些实施方案中，本发明提供一种包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的癌症的药物中的用途，其中该药物与免疫肿瘤学药剂组合使用。
[0025]
在一些实施方案中，癌症选自如本文中所述的那些癌症。在一些实施方案中，癌症为实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症与mt1-mmp相关。在一些实施方案中，癌症与柄蛋白-4相关。在一些实施方案中，癌症与epha2相关。在一些实施方案中，癌症与pd-l1相关。在一些实施方案中，癌症与psma相关。
[0026]
在一些实施方案中，如本文中所述，包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物选自包含一个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物。在一些实施方案中，如本文中所述，包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物选自包含两个或更多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物。
[0027]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物为bcy11863(亦称为bt7480)或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物为bcy13272(亦称为bt7455)或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物为bcy12491或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物为bcy11864或其医药学上可接受的盐。
[0028]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自如本文中所述的免疫肿瘤学药剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为检查点抑制剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为pd-1拮抗剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为帕博利珠单抗。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为纳武单抗(nivolumab)。
[0029]
在一些实施方案中，本发明提供一种用于增加癌症患者中的免疫反应的方法，其包括向患者施用治疗有效量的bt7480或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供bt7480或其医药学上可接受的盐在制备用于增加癌症患者中的免疫反应的药物中的用途。在一些实施方案中，本发明提供一种用于治疗患者的癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的bt7480或其医药学上可接受的盐和免疫肿瘤学药剂。在一些实施方案中，本发明提供bt7480或其医药学上可接受的盐在制备用于治疗患者中的癌症的药物中的用途，其中该药物与免疫肿瘤学药剂组合使用。
[0030]
在一些实施方案中，本发明提供一种用于增加癌症患者中的免疫反应的方法，其包括向患者施用治疗有效量的bt7455或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供bt7455或其医药学上可接受的盐在制备用于增加癌症患者中的免疫反应的药物中的用途。在一些实施方案中，本发明提供一种用于治疗患者的癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的bt7455或其医药学上可接受的盐和免疫肿瘤学药剂。在一些实施方案中，本发明提供bt7455或其医药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的癌症的药物中的用途，其中该药物与免疫肿瘤学药剂组合使用。
[0031]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以约0.001-100mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自本文中所述的那些杂串联双环肽复合物，例如bt7480或bt7455或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以约0.001-0.01mg/kg、约0.01-0.1mg/kg、约0.1-1mg/kg、约1-10mg/kg、约10-25mg/kg、约25-50mg/kg或约50-100mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以约0.1-75mg/kg、约1-50mg/kg、约5-25mg/kg或约7.5-20mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以约0.001mg/kg、约0.005mg/kg、约0.01mg/kg、约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.25mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约5mg/kg、约7.5mg/kg、约10mg/kg、约12.5mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约40mg/kg或约50mg/kg的剂量施用。
[0032]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以一周1次、2次、3次或4次的频率施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自本文中所述的那些杂串联双环肽复合物，例如bt7480或bt7455或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物每天一次施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物每2天一次施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物每3天一次施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物每4天一次施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物每5天一次施用。在一些实施方案中，杂串联
双环肽复合物以一周一次的频率施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以每1.5周一次的频率施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以每2周一次的频率施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以每2.5周一次的频率施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以每3周一次的频率施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以每4周一次的频率施用。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物以一月一次的频率施用。
[0033]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物施用持续约1-4周的治疗时段。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自本文中所述的那些杂串联双环肽复合物，例如bt7480或bt7455或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物施用持续约5-8周的治疗时段。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物施用持续约9-12周的治疗时段。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物施用持续约13-20周的治疗时段。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物施用持续约21-28周的治疗时段。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物施用持续约4、8、12、16、20、24或28周的治疗时段。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物施用持续约30周或更长的治疗时段。
[0034]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物经由静脉内弹丸注射(bolus injection)施用至患者。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自本文中所述的那些杂串联双环肽复合物，例如bt7480或bt7455或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物经由静脉内输注施用至患者。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物的静脉内输注为约5-10分钟输注。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物的静脉内输注为约10-20分钟输注。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物的静脉内输注为约20-40分钟输注。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物的静脉内输注为约45或50或55分钟输注。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物的静脉内输注为约1小时输注。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物的静脉内输注为约1-1.5小时输注。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物的静脉内输注为约1.5-2小时输注。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物的静脉内输注为约2-3小时输注。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物的静脉内输注为超过3小时输注。
[0035]
免疫肿瘤学药剂以根据fda建议或批准的剂量方案施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以约1-20mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以约1-5mg/kg、约6-10mg/kg、约11-15mg/kg或约16-20mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以约1-10mg/kg、约5-15mg/kg或约10-20mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以约2、3、4、5、6、7、8、9或10mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以约11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以一周1次、2次、3次或4次的频率施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂每天一次施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂每2天一次施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂每3天一次施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂每4天一次施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂每5天一次施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以一周一次的频率施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以每1.5周一次的频率施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以每2周一次的频率施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以每2.5周一次的频率施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以每3周一次的频率施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂以每4周一次的频率施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤
学药剂以一月一次的频率施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂施用持续约1-4周的治疗时段。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂施用持续约9-12周、约13-20周、约21-28周或约29-36周的治疗时段。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂施用持续约36周或更长的治疗时段。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂经由静脉内注射施用至患者。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂经由静脉内输注施用至患者。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂的静脉内输注为约5-10分钟输注。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂的静脉内输注为约10-20分钟或约20-40分钟输注。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂的静脉内输注为约30、40、45、50、55或60分钟输注。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂的静脉内输注为约1-1.5小时、约1.5-2小时或约2-3小时输注。
[0036]
在一些实施方案中，包含杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐的药物选自如本发明实施例中所示的杂串联双环肽复合物制剂。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自本文中所述的那些杂串联双环肽复合物，例如bt7480或bt7455或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，包含杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐的药物进一步包含组氨酸。在一些实施方案中，包含杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐和组氨酸的药物呈约ph7。在一些实施方案中，包含杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐的药物进一步包含蔗糖。在一些实施方案中，包含杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐的药物进一步包含约10％w/v蔗糖。在一些实施方案中，包含杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐的药物进一步包含水。在一些实施方案中，本发明提供一种药物，其包含杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐、组氨酸、蔗糖和水，其中该药物呈约ph7。
[0037]
示例性杂串联双环肽复合物
[0038]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐包含：
[0039]
(a)第一肽配体，其结合癌细胞上存在的组分；其经由接头缀合至
[0040]
(b)一个或多个cd137结合性肽配体；
[0041]
其中所述肽配体中的每一个包含多肽，所述多肽包含：经由至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，和分子骨架，所述分子骨架与多肽的反应性基团形成共价键以使得在分子骨架上形成至少两个多肽环。
[0042]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐包含：
[0043]
(a)第一肽配体，其结合癌细胞上存在的组分；其经由接头缀合至
[0044]
(b)一个或多个cd137结合性肽配体；
[0045]
其中所述肽配体中的每一个包含多肽，所述多肽包含：经由至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，和分子骨架，所述分子骨架与多肽的半胱氨酸残基形成共价键以使得在分子骨架上形成至少两个多肽环。
[0046]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐包含：
[0047]
(a)第一肽配体，其结合癌细胞上存在的组分；其经由接头缀合至
[0048]
(b)一个cd137结合性肽配体；
[0049]
其中所述肽配体中的每一个包含多肽，所述多肽包含：经由至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，和分子骨架，所述分子骨架与多肽的反应性基团形成共价键以使得在分子骨架上形成至少两个多肽环。
[0050]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐包含：
[0051]
(a)第一肽配体，其结合癌细胞上存在的组分；其经由接头缀合至
[0052]
(b)一个cd137结合性肽配体；
[0053]
其中所述肽配体中的每一个包含多肽，所述多肽包含：经由至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，和分子骨架，所述分子骨架与多肽的半胱氨酸残基形成共价键以使得在分子骨架上形成至少两个多肽环。
[0054]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐包含：
[0055]
(a)第一肽配体，其结合癌细胞上存在的组分；其经由接头缀合至
[0056]
b)两个或更多个cd137结合性肽配体；
[0057]
其中所述肽配体中的每一个包含多肽，所述多肽包含：经由至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，和分子骨架，所述分子骨架与多肽的反应性基团形成共价键以使得在分子骨架上形成至少两个多肽环。
[0058]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐包含：
[0059]
(a)第一肽配体，其结合癌细胞上存在的组分；其经由接头缀合至
[0060]
(b)两个或更多个cd137结合性肽配体；
[0061]
其中所述肽配体中的每一个包含多肽，所述多肽包含：经由至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，和分子骨架，所述分子骨架与多肽的半胱氨酸残基形成共价键以使得在分子骨架上形成至少两个多肽环。
[0062]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐包含：
[0063]
(a)第一肽配体，其结合癌细胞上存在的组分；其经由接头缀合至
[0064]
(b)两个cd137结合性肽配体；
[0065]
其中所述肽配体中的每一个包含多肽，所述多肽包含：经由至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，和分子骨架，所述分子骨架与多肽的反应性基团形成共价键以使得在分子骨架上形成至少两个多肽环。
[0066]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐包含：
[0067]
(a)第一肽配体，其结合癌细胞上存在的组分；其经由接头缀合至
[0068]
(b)两个cd137结合性肽配体；
[0069]
其中所述肽配体中的每一个包含多肽，所述多肽包含：经由至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，和分子骨架，所述分子骨架与多肽的半胱氨酸残基形成共价键以使得在分子骨架上形成至少两个多肽环。
[0070]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐包含：
[0071]
(a)第一肽配体，其结合癌细胞上存在的组分；其经由接头缀合至
[0072]
(b)三个cd137结合性肽配体；
[0073]
其中所述肽配体中的每一个包含多肽，所述多肽包含：经由至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，和分子骨架，所述分子骨架与多肽的反应性基团形成共价键以使得在分子骨架上形成至少两个多肽环。
[0074]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐包含：
[0075]
(a)第一肽配体，其结合癌细胞上存在的组分；其经由接头缀合至
[0076]
(b)三个cd137结合性肽配体；
[0077]
其中所述肽配体中的每一个包含多肽，所述多肽包含：经由至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，和分子骨架，所述分子骨架与多肽的半胱氨酸残基形成共价键以使得在分子骨架上形成至少两个多肽环。
[0078]
第一肽配体
[0079]
本文中对术语“癌细胞”的提及包括已知参与癌症的任何细胞。癌细胞在负责调控细胞分裂的基因受损时形成。癌发生由正常细胞的基因物质的突变和表突变引起，其干扰增殖与细胞死亡之间的正常平衡。此引起不受控的细胞分裂和那些细胞经由体内的自然选择进化。不受控和通常快速的细胞增殖可以引起良性或恶性肿瘤(癌症)。良性肿瘤并不扩散至身体的其他部分或侵入其他组织。恶性肿瘤可侵入其他器官，扩散至远程位置(转移)并且变得危及生命。
[0080]
在一些实施方案中，癌细胞选自ht1080、a549、sc-ov-3、pc3、ht1376、nci-h292、lncap、mc38、mc38#13、4t1-d02、h322、ht29、t47d和rko肿瘤细胞。
[0081]
在一些实施方案中，癌细胞上存在的组分为柄蛋白-4(nectin-4)。
[0082]
柄蛋白-4为一种属于柄蛋白蛋白家族的表面分子，柄蛋白蛋白家族包含4个成员。柄蛋白为在各种生物过程中起重要作用的细胞黏附分子，所述生物过程诸如上皮细胞、内皮细胞、免疫细胞和神经元细胞在发育和成体寿命期间的极性、增殖、分化和迁移。其参与人类中的一些病理学过程。其为脊髓灰白质炎病毒、单纯疱疹病毒和麻疹病毒的主要受体。编码柄蛋白-1(pvrl1)或柄蛋白-4(pvrl4)的基因中的突变引起与其他异常相关的外胚层发育不良综合征。柄蛋白-4在胎儿发育期间表达。在成人组织中，其表达比其他家族成员的表达更受限。柄蛋白-4分别在50％、49％和86％的乳腺癌、卵巢癌和肺癌中为肿瘤相关抗原，主要在不良预后的肿瘤上。未在对应正常组织中检测到其表达。在乳腺肿瘤中，柄蛋白-4主要在三阴性和erbb2 癌中表达。在患有此类癌症的患者的血清中，可溶性形式的柄蛋白-4的检测与不良预后相关。血清柄蛋白-4的水平在转移性进展期间增加并且在治疗之后减少。这些结果表明柄蛋白-4可为用于治疗癌症的可靠靶标。因此，一些抗柄蛋白-4抗体在现有技术中已进行描述。具体地，恩诺单抗维多汀(enfortumab vedotin，asg-22me)为靶向柄蛋白-4的抗体-药物缀合物(adc)，且目前在临床上经研究用于治疗罹患实体肿瘤的患者。
[0083]
在一些实施方案中，第一肽配体包含柄蛋白-4结合性双环肽配体。
[0084]
在一些实施方案中，柄蛋白-4结合性双环肽配体选自wo2019/243832中公开的那些柄蛋白-4结合性双环肽配体，该文献的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0085]
在一些实施方案中，柄蛋白-4结合性双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0086]ci
p[1nal][dd]c
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:1；本文中称为bcy8116)；
[0087]ci
p[1nal][dd]c
ii
m[harg]d[dw]stp[hyp][dw]c
iii
(seq id no:2)；
[0088]ci
p[1nal][dk](sar
10-(b-ala))c
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:3)；
[0089]ci
pfgc
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:4；本文中称为bcy11414)；
[0090]ci
p[1nal][dk]c
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:14)；
[0091]
[merpro]ip[1nal][dk]c
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:15；本文中称为bcy12363)；
[0092]ci
p[1nal][dk]c
ii
m[harg]dwstp[hyp]w[cysam]
iii
(seq id no:16)；
[0093]
[merpro]ip[1nal][dk]c
ii
m[harg]dwstp[hyp]w[cysam]
iii
(seq id no:17；本文中称为bcy12365)；
[0094]ci
p[1nal][dk]c
ii
m[harg]hwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:18)；
[0095]ci
p[1nal][dk]c
ii
m[harg]ewstp[hyp]wc
iii
(seq id no:19)；
[0096]ci
p[1nal][de]c
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:20；本文中称为bcy12368)；
[0097]ci
p[1nal][da]c
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:21；本文中称为bcy12369)；
[0098]ci
p[1nal][de]c
ii
l[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:22；本文中称为bcy12370)；和
[0099]ci
p[1nal][de]c
ii
m[harg]ewstp[hyp]wc
iii
(seq id no:23；本文中称为bcy12384)；
[0100]
其中[merpro]i、ci、c
ii
、c
iii
和[cysam]
iii
表示选自半胱氨酸、merpro和cysam的第一(i)、第二(ii)和第三(iii)反应性基团，1nal表示1-萘基丙氨酸，harg表示高精氨酸，hyp表示反式-4-羟基-l-脯氨酸，sar
10
表示10个肌氨酸单元，b-ala表示β-丙氨酸，merpro表示3-巯基丙酸，cysam表示半胱胺。
[0101]
在一些实施方案中，柄蛋白-4结合性双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0102]ci
p[1nal][dd]c
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:1；本文中称为bcy8116)；
[0103]ci
p[1nal][dk](sar
10-(b-ala))c
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:3)；和
[0104]ci
pfgc
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:4；本文中称为bcy11414)；
[0105]
其中ci、c
ii
和c
iii
分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基，1nal表示1-萘基丙氨酸，harg表示高精氨酸，hyp表示反式-4-羟基-l-脯氨酸，sar
10
表示10个肌氨酸单元，b-ala表示β-丙氨酸。
[0106]
在一些实施方案中，柄蛋白-4结合性双环肽配体任选地包含n端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0107]
seq id no:1(本文中称为bcy8116)；
[0108]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-(seq id no:1)(本文中称为bcy8846)；
[0109]
[pya]-(seq id no:1)(本文中称为bcy11015)；
[0110]
[pya]-[b-ala]-(seq id no:1)(本文中称为bcy11016)；
[0111]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-(seq id no:2)(本文中称为bcy11942)；
[0112]
ac-(seq id no:3)(本文中称为bcy8831)；
[0113]
seq id no:4(本文中称为bcy11414)；
[0114]
[pya]-[b-ala]-(seq id no:14)(本文中称为bcy11143)；
[0115]
棕榈酸-yglu-yglu-(seq id no:14)(本文中称为bcy12371)；
[0116]
ac-(seq id no:14)(本文中称为bcy12024)；
[0117]
ac-(seq id no:16)(本文中称为bcy12364)；
[0118]
ac-(seq id no:18)(本文中称为bcy12366)；和
[0119]
ac-(seq id no:19)(本文中称为bcy12367)；
[0120]
其中pya表示4-戊炔酸，b-ala表示β-丙氨酸，sar
10
表示10个肌氨酸单元。
[0121]
在一些实施方案中，柄蛋白-4结合性双环肽配体任选地包含n端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0122]
seq id no:1(本文中称为bcy8116)；
[0123]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-(seq id no:1)(本文中称为bcy8846)；
[0124]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-(seq id no:2)(本文中称为bcy11942)；
[0125]
ac-(seq id no:3)(本文中称为bcy8831)；和
[0126]
seq id no:4(本文中称为bcy11414)；
[0127]
其中pya表示4-戊炔酸，b-ala表示β-丙氨酸，sar
10
表示10个肌氨酸单元。
[0128]
在一些实施方案中，柄蛋白-4结合性双环肽配体包含seq id no:1(本文中称为bcy8116)。
[0129]
在一些实施方案中，柄蛋白-4结合性双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0130]ci
p[1nal][dd]c
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:1；下文称为bcy8116)；
[0131]ci
p[1nal][dd]c
ii
m[harg]d[dw]stp[hyp][dw]c
iii
(seq id no:2；下文称为bcy11415)；和
[0132]ci
p[1nal][dk](sar
10-(b-ala))c
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:3)；
[0133]ci
pfgc
ii
m[harg]dwstp[hyp]wc
iii
(seq id no:4；下文称为bcy11414)；
[0134]
其中ci、c
ii
和c
iii
分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基，1nal表示1-萘基丙氨酸，harg表示高精氨酸，hyp表示羟基脯氨酸，sar
10
表示10个肌氨酸单元，b-ala表示β-丙氨酸。
[0135]
在另一实施方案中，柄蛋白-4结合性双环肽配体任选地包含n端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0136]
seq id no:1(本文中称为bcy8116)；
[0137]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-(seq id no:1)(下文称为bcy8846)；
[0138]
seq id no:2(本文中称为bcy11415)；
[0139]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-(seq id no:2)(下文称为bcy11942)；
[0140]
ac-(seq id no:3)(本文中称为bcy8831)；和
[0141]
seq id no:4(本文中称为bcy11414)；
[0142]
其中pya表示4-戊炔酸，b-ala表示β-丙氨酸，sar
10
表示10个肌氨酸单元。
[0143]
在一些实施方案中，癌细胞上存在的组分为epha2。
[0144]
eph受体酪氨酸激酶(eph)属于一大组受体酪氨酸激酶(rtk)，即使蛋白在酪氨酸残基上磷酸化的激酶。eph和其膜结合肝配蛋白(ephrin)配体(肝配蛋白)控制细胞定位和组织组构(poliakov等人(2004)dev cell 7,465-80)。功能和生物化学eph反应在较高配体低聚合状态下发生(stein等人(1998)genes dev 12,667-678)。
[0145]
在其他模式化功能中，已展示各种eph和肝配蛋白在血管发育中起作用。ephb4和肝配蛋白-b2的敲除导致缺乏将微血管床重塑为血管的能力(poliakov等人，见上文)和胚胎致死性。亦已在最新形成的成人微血管中观察到一些eph受体和肝配蛋白的持久表达
(brantley-sieders等人(2004)curr pharm des 10，3431-42；adams(2003)j anat 202,105-12)。
[0146]
还已经观察到一些肝配蛋白及其受体在成人中的失调再出现有助于肿瘤侵袭、转移和新血管生成(nakamoto等人(2002)microsc res tech 59,58-67；brantley-sieders等人，见上文)。此外，已发现一些eph家族成员在来自多种人类肿瘤的肿瘤细胞上过表达(brantley-sieders等人,见上文)；marme(2002)ann hematol 81增刊2,s66；booth等人(2002)nat med 8,1360-1)。
[0147]
eph受体a2(肝配蛋白a型受体2)为在人类中由epha2基因编码的蛋白。
[0148]
epha2在人类的多种癌症中上调，通常与疾病进展、转移和不良预后相关联，例如乳腺癌(zelinski等人(2001)cancer res.61,2301
–
2306；zhuang等人(2010)cancer res.70,299
–
308；brantley-sieders等人(2011)plos one6,e24426)、肺癌(brannan等人(2009)cancer prev res(phila)2,1039
–
1049；kinch等人(2003)clin cancer res.9,613-618；guo等人(2013)j thorac oncol.8,301-308)、胃癌(nakamura等人(2005)cancer sci.96,42-47；yuan等人(2009)dig dis sci 54,2410-2417),pancreatic(mudali等人(2006)clin exp metastasis 23,357-365)、前列腺癌(walker-daniels等人(1999)prostate 41,275
–
280)、肝癌(yang等人(2009)hepatol res.39,1169
–
1177)和胶质母细胞瘤(wykosky等人(2005)mol cancer res.3,541
–
551；li等人(2010)tumor biol.31,477
–
488)。
[0149]
尽管在包括肿瘤细胞生长、存活、侵袭和血管生成的癌症进展的多个阶段存在相互作用的证据，仍未定义epha2在癌症进展中的全部作用。epha2表达的下调抑制肿瘤癌细胞传播(binda等人(2012)cancer cell 22,765-780)，而epha2阻断抑制vegf诱导的细胞迁移(hess等人(2001)cancer res.61,3250-3255)、出芽和血管生成(cheng等人(2002)mol cancer res.1，2-11；lin等人(2007)cancer 109，332-40)和转移性进展(brantley-sieders等人(2005)faseb j.19,1884-1886)。
[0150]
已展示针对epha2的抗体药物缀合物显著减少大鼠和小鼠异种移植模型中的肿瘤生长(jackson等人(2008)cancer research 68,9367-9374)，且已在人类中尝试了类似方法，尽管因治疗相关不良事件而不得不中止治疗(annunziata等人(2013)invest new drugs 31,77-84)。
[0151]
在一些实施方案中，第一肽配体包含epha2结合性双环肽配体。
[0152]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体选自wo2019/122860、wo2019/122861和wo2019/122863中公开的那些epha2结合性双环肽配体，所述文献中的每一个的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0153]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0154]ci
[hyp]lvnplc
ii
lhp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:24)；
[0155]ci
lwdptpc
ii
anlhl[harg]c
iii
(seq id no:25)；
[0156]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[k(pya)]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:26)；
[0157]ci
[hyp][k(pya)]vnplc
ii
lhp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:27)；
[0158]ci
[hyp]lvnplc
ii
[k(pya)]hp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:28)；
[0159]ci
[hyp]lvnplc
ii
lkp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:29)；
[0160]ci
[hyp]kvnplc
ii
lhp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:30)；
[0161]ci
[hyp]lvnplc
ii
khp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:31)；
[0162]ci
[hyp]lvnplc
ii
lhp[de]w[harg]c
iii
(seq id no:32)；
[0163]ci
[hyp]lvnplc
ii
lep[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:33)；
[0164]ci
[hyp]lvnplc
ii
lhp[dd]wtc
iii
(seq id no:34)；
[0165]ci
[hyp]lvnplc
ii
lep[dd]wtc
iii
(seq id no:35)；
[0166]ci
[hyp]lvnplc
ii
lep[da]wtc
iii
(seq id no:36)；
[0167]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[3,3-dpa]p[dd]wtc
iii
(seq id no:37；本文中称为bcy12860)；
[0168]ci
[hyp][cba]vnplc
ii
lhp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:38)；
[0169]ci
[hyp][cba]vnplc
ii
lep[dd]wtc
iii
(seq id no:39)；
[0170]ci
[hyp][cba]vnplc
ii
l[3,3-dpa]p[dd]wtc
iii
(seq id no:40)；
[0171]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[3,3-dpa]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:41)；
[0172]ci
[hyp]lvnplc
ii
lhp[d1nal]w[harg]c
iii
(seq id no:42)；
[0173]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[1nal]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:43)；
[0174]ci
[hyp]lvnplc
ii
lep[d1nal]wtc
iii
(seq id no:44)；
[0175]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[1nal]p[dd]wtc
iii
(seq id no:45；本文中称为bcy13119)；
[0176]ci
[hyp][cba]vnplc
ii
lep[da]wtc
iii
(seq id no:46)；
[0177]ci
[hyp][hglu]vnplc
ii
lhp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:47)；
[0178]ci
[hyp]lvnplc
ii
[hglu]hp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:48)；
[0179]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[hglu]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:49)；
[0180]ci
[hyp]lvnplc
ii
lhp[dnle]w[harg]c
iii
(seq id no:50)；
[0181]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[nle]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:51)；
[0182]
[merpro]i[hyp]lvnplc
ii
l[3,3-dpa]p[dd]wtc
iii
(seq id no:154)；
[0183]ci
[hyp]lvnplc
ii
lhp[dd]w[harg][cysam]
iii
(seq id no:155)；
[0184]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[his3me]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:156)；
[0185]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[his1me]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:157)；
[0186]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[4thiaz]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:158)；
[0187]ci
[hyp]lvnplc
ii
lfp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:159)；
[0188]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[thi]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:160)；
[0189]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[3thi]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:161)；
[0190]ci
[hyp]lvnplc
ii
lnp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:162)；
[0191]ci
[hyp]lvnplc
ii
lqp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:163)；和
[0192]ci
[hyp]lvnplc
ii
l[k(pya-(棕榈酰基-glu-lysn3)]p[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:164)；
[0193]
其中[merpro]i、ci、c
ii
、c
iii
和[cysam]
iii
表示选自半胱氨酸、merpro和cysam的第一(i)、第二(ii)和第三(iii)反应性基团，hyp表示反式-4-羟基-l-脯氨酸，harg表示高精氨酸，pya表示4-戊炔酸，3,3-dpa表示3,3-二苯基丙氨酸，cba表示β-环丁基丙氨酸，1nal表示1-萘基丙氨酸，hglu表示高谷氨酸，thi表示2-噻吩基-丙氨酸，4thiaz表示β-(4-噻唑
基)-丙氨酸，his1me表示n1-甲基-l-组氨酸，his3me表示n3-甲基-l-组氨酸，3thi表示3-噻吩基丙氨酸，棕榈酰基-glu-lysn3[pya]表示：
[0194][0195]
(棕榈酰基-glu-lysn3)[pya]，
[0196]
[k(pya-(棕榈酰基-glu-lysn3)]表示:
[0197][0198]
[k(pya(棕榈酰基-glu-lysn3))]，
[0199]
nle表示正亮氨酸，merpro表示3-巯基丙酸，cysam表示半胱胺。
[0200]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体包含以下的氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0201]ci
[hyp]lvnplc
ii
lhp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:24)；
[0202]
其中ci、c
ii
和c
iii
表示第一(i)、第二(ii)和第三(iii)半胱氨酸基团，hyp表示反式-4-羟基-l-脯氨酸，harg表示高精氨酸。
[0203]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体包含以下的氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0204]ci
[hyp]lvnplc
ii
lep[d1nal]wtc
iii
(seq id no:44)；
[0205]
其中ci、c
ii
和c
iii
表示第一(i)、第二(ii)和第三(iii)半胱氨酸基团，hyp表示反式-4-羟基-l-脯氨酸，1nal表示1-萘基丙氨酸。
[0206]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体任选地包含n端和/或c端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0207]
a-[harg]-d-(seq id no:24)(本文中称为bcy9594)；
[0208]
[b-ala]-[sar
10
]-a-[harg]-d-(seq id no:24)(本文中称为bcy6099)；
[0209]
[pya]-a-[harg]-d-(seq no:24)(本文中称为bcy11813)；
[0210]
ac-a-[harg]-d-(seq id no:24)-[k(pya)](本文中称为bcy11814)；
[0211]
ac-a-[harg]-d-(seq id no:24)-k(本文中称为bcy12734)；
[0212]
[nmeala]-[harg]-d-(seq id no:24)(本文中称为bcy13121)；
[0213]
[ac]-(seq id no:24)-l[dh]g[dk](本文中称为bcy13125)；
[0214]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-vgp-(seq id no:25)(本文中称为bcy8941)；
[0215]
ac-a-[harg]-d-(seq id no:26)(本文中称为bcy11815)；
[0216]
ac-a-[harg]-d-(seq id no:27)(本文中称为bcy11816)；
[0217]
ac-a-[harg]-d-(seq id no:28)(本文中称为bcy11817)；
[0218]
ac-a-[harg]-d-(seq id no:29)(本文中称为bcy12735)；
[0219]
(棕榈酰基-glu-lysn3)[pya]a[harg]d-(seq id no:29)(下文称为bcy14327)；
[0220]
ac-a-[harg]-d-(seq id no:30)(本文中称为bcy12736)；
[0221]
ac-a-[harg]-d-(seq id no:31)(本文中称为bcy12737)；
[0222]
a-[harg]-d-(seq id no:32)(本文中称为bcy12738)；
[0223]
a-[harg]-e-(seq id no:32)(本文中称为bcy12739)；
[0224]
a-[harg]-d-(seq id no:33)(本文中称为bcy12854)；
[0225]
a-[harg]-d-(seq id no:34)(本文中称为bcy12855)；
[0226]
a-[harg]-d-(seq id no:35)(本文中称为bcy12856)；
[0227]
a-[harg]-d-(seq id no:35)-[da](本文中称为bcy12857)；
[0228]
(seq id no:35)-[da](本文中称为bcy12861)；
[0229]
[nmeala]-[harg]-d-(seq id no:35)(本文中称为bcy13122)；
[0230]
[da]-ed-(seq id no:35)(本文中称为bcy13126)；
[0231]
[da]-[da]-d-(seq id no:35)(本文中称为bcy13127)；
[0232]
ad-(seq id no:35)(本文中称为bcy13128)；
[0233]
a-[harg]-d-(seq id no:36)(本文中称为bcy12858)；
[0234]
a-[harg]-d-(seq id no:37)(本文中称为bcy12859)；
[0235]
ac-(seq id no:37)-[dk](本文中称为bcy13120)；
[0236]
a-[harg]-d-(seq id no:38)(本文中称为bcy12862)；
[0237]
a-[harg]-d-(seq id no:39)(本文中称为bcy12863)；
[0238]
[da]-[harg]-d-(seq id no:39)-[da](本文中称为bcy12864)；
[0239]
(seq id no:40)-[da](本文中称为bcy12865)；
[0240]
a-[harg]-d-(seq id no:41)(本文中称为bcy12866)；
[0241]
a-[harg]-d-(seq id no:42)(本文中称为bcy13116)；
[0242]
a-[harg]-d-(seq id no:43)(本文中称为bcy13117)；
[0243]
a-[harg]-d-(seq id no:44)(本文中称为bcy13118)；
[0244]
[da]-[harg]-d-(seq id no:46)-[da](本文中称为bcy13123)；
[0245]
[d1nal]-[harg]-d-(seq id no:46)-[da](本文中称为bcy13124)；
[0246]
a-[harg]-d-(seq id no:47)(本文中称为bcy13130)；
[0247]
a-[harg]-d-(seq id no:48)(本文中称为bcy13131)；
[0248]
a-[harg]-d-(seq id no:49)(本文中称为bcy13132)；
[0249]
a-[harg]-d-(seq id no:50)(本文中称为bcy13134)；
[0250]
a-[harg]-d-(seq id no:51)(本文中称为bcy13135)；
[0251]
(seq id no:154)-[dk](本文中称为bcy13129)；
[0252]
a[harg]d-(seq id no:155)(本文中称为bcy13133)；
[0253]
a[harg]d-(seq id no:156)(本文中称为bcy13917)；
[0254]
a[harg]d-(seq id no:157)(本文中称为bcy13918)；
[0255]
a[harg]d-(seq id no:158)(本文中称为bcy13919)；
[0256]
a[harg]d-(seq id no:159)(本文中称为bcy13920)；
[0257]
a[harg]d-(seq id no:160)(本文中称为bcy13922)；
[0258]
a[harg]d-(seq id no:161)(本文中称为bcy13923)；
[0259]
a[harg]d-(seq id no:162)(本文中称为bcy14047)；
[0260]
a[harg]d-(seq id no:163)(本文中称为bcy14048)；和
[0261]
a[harg]d-(seq id no:164)(本文中称为bcy14313)；
[0262]
其中pya表示4-戊炔酸，b-ala表示β-丙氨酸，sar
10
表示10个肌氨酸单元，harg表示高精氨酸，nmeala表示n-甲基-丙氨酸，1nal表示1-萘基丙氨酸，棕榈酰基-glu-lysn3[pya]表示：
[0263][0264]
(棕榈酰基-glu-lysn3)[pya]。
[0265]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体任选地包含n端和/或c端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0266]
a-[harg]-d-(seq id no:24)(本文中称为bcy9594)；
[0267]
其中harg表示高精氨酸。
[0268]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体任选地包含n端和/或c端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0269]
a-[harg]-d-(seq id no:44)(本文中称为bcy13118)；
[0270]
其中harg表示高精氨酸。
[0271]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体包含氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0272]ci
[hyp]lvnplc
ii
lhp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:24)；和
[0273]ci
lwdptpc
ii
anlhl[harg]c
iii
(seq id no:25)；
[0274]
其中ci、c
ii
和c
iii
分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基，hyp表示羟基脯氨酸，dd表示呈d构型的天冬氨酸，harg表示高精氨酸。
[0275]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体包含氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0276]ci
[hyp]lvnplc
ii
lhp[dd]w[harg]c
iii
(seq id no:24)；
[0277]
其中ci、c
ii
和c
iii
分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基，hyp表示羟基脯氨酸，dd表示呈d构型的天冬氨酸，harg表示高精氨酸。
[0278]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体包含n端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0279]
a-harg-d-(seq id no:24)(下文称为bcy9594)；
[0280]
[b-ala]-[sar
10
]-a-[harg]-d-(seq id no:24)(下文称为bcy6099)；
[0281]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-a-[harg]-d-(seq id no:24)(下文称为bcy6169)；和
[0282]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-vgp-(seq id no:25)(下文称为bcy8941)；
[0283]
其中harg表示高精氨酸，pya表示4-戊炔酸，sar
10
表示10个肌氨酸单元，b-ala表示β-丙氨酸。
[0284]
在一些实施方案中，epha2结合性双环肽配体包含n端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0285]
a-harg-d-(seq id no:24)(下文称为bcy9594)；
[0286]
其中harg表示高精氨酸。
[0287]
在一些实施方案中，癌细胞上存在的组分为pd-l1。
[0288]
程序性细胞死亡1配体1(pd-l1)为由小鼠19号染色体和人类9号染色体上的cd274基因编码的290个氨基酸的i型跨膜蛋白。pd-l1表达参与免疫反应逃逸，所述免疫反应参与慢性感染，例如慢性病毒感染(包括例如hiv、hbv、hcv和htlv等)、慢性细菌感染(包括例如幽门螺杆菌(helicobacter pylori)等)和慢性寄生虫感染(包括例如曼森氏裂体吸虫(schistosoma mansoni))。已在大量组织和细胞类型中检测到pd-l1表达，所述组织和细胞类型包括t细胞、b细胞、巨噬细胞、树突细胞和非造血细胞，所述非造血细胞包括内皮细胞、肝细胞、肌细胞和胎盘。
[0289]
pd-l1表达亦参与抗肿瘤免疫活性的抑制。肿瘤表达可由宿主t细胞识别的抗原，但肿瘤的免疫清除是罕见的。此失败部分归因于肿瘤微环境的免疫抑制。许多肿瘤上的pd-l1表达为此抑制环境的组分且与其他免疫抑制信号协同作用。pd-l1表达已原位展示在广泛多种实体肿瘤上，包括乳腺、肺、结肠、卵巢、黑素瘤、膀胱、肝、唾液腺、胃、神经胶质瘤、甲状腺、胸腺上皮、头部和颈部肿瘤(brown ja等人.2003immunol.170:1257-66；dong h等人.2002nat.med.8:793-800；hamanishi j,等人.2007proc.natl.acad.sci.usa 104:3360-65；strome se等人.2003cancer res.63:6501-5；inman ba等人.2007cancer 109:1499-505；konishi j等人.2004clin.cancer res.10:5094-100；nakanishi j等人.2007cancer immunol.immunother.56:1173-82；nomi t等人.2007clin.cancer res.13:2151-57；thompson rh等人.2004proc.natl.acad.sci.usa 101:17174-79；wu c等人.2006acta histochem.108:19-24)。另外，pd-l1受体程序性细胞死亡蛋白1(亦称为pd-1和cd279)的表达在肿瘤浸润性淋巴细胞上上调，这也有助于肿瘤免疫抑制(blank c等人2003immunol.171:4574-81)。最重要地，使肿瘤上的pd-l1表达与疾病结果关联的研究展示，pd-l1表达很大程度上与肾癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌和胰腺癌中的不利预后相关(hamanishi j等人.2007proc.natl.acad.sci.usa 104:3360-65；inman ba等人.2007cancer 109:1499-505；konishi j等人.2004clin.cancer res.10:5094-100；nakanishi j等人.2007cancer immunol.immunother.56:1173-82；nomi t等人.2007clin.cancer res.13:2151-57；thompson rh等人.2004proc.natl.acad.sci.usa 101:17174-79；wu c等人.2006acta histochem.108:19-24)。另外，这些研究表明，肿瘤上的较高pd-l1表达水平可促进肿瘤阶段的进展和向更深组织结构中的侵袭。
[0290]
pd-1路径还可能在血液学恶性病中起作用。pd-l1表达在多发性骨髓瘤细胞上但不表达在正常浆细胞上(liu j等人2007blood 110:296-304)。pd-l1表达在一些初级t细胞淋巴瘤上，尤其表达在异生性大细胞t淋巴瘤(anaplastic large cell t lymphomas)上
(brown ja等人,2003immunol.170:1257-66)。pd-1高度表达在血管免疫母细胞淋巴瘤的t细胞上，且pd-l1表达在相关滤泡性树突细胞网络上(dorfman dm等人2006am.j.surg.pathol.30:802-10)。在结节性淋巴细胞主导的霍奇金氏淋巴瘤中，与淋巴细胞性或组织细胞性(l&h)细胞相关的t细胞表达pd-1。使用由pd-1连接诱导的基因的读数的微阵列分析表明，肿瘤相关t细胞对霍奇金氏淋巴瘤中的原位pd-1信号作出反应(chemnitz jm等人2007blood 110:3226-33)。pd-1和pd-l1表达在htlv-1介导的成人t细胞白血病和淋巴瘤中的cd4 t细胞上(shimauchi t等人2007int.j.cancer 121:2585-90)。这些肿瘤细胞对tcr信号具有低反应性。
[0291]
动物模型中的研究显示，肿瘤上的pd-l1抑制t细胞活化和肿瘤细胞的溶解，并且在一些情况下引起增加的肿瘤特异性t细胞死亡(dong h等人2002nat.med.8:793-800；hirano f等人2005cancer res.65:1089-96)。肿瘤相关apc也可以利用pd-1:pd-l1路径来控制抗肿瘤t细胞反应。肿瘤相关骨髓dc群体上的pd-l1表达经由肿瘤环境因素上调(curiel tj等人2003nat.med.9:562-67)。b16黑素瘤的肿瘤引流淋巴结中的浆细胞样树突细胞(dc)表达ido，其强烈活化调节性t细胞的抑制活性。经ido处理的调节性t细胞的抑制活性需要细胞与表达ido的dc接触(sharma md等人2007clin.invest.117:2570-82)。
[0292]
在一些实施方案中，第一肽配体包含pd-l1结合性双环肽配体。
[0293]
在一些实施方案中，pd-l1结合性双环肽配体选自在wo2020/128526和wo2020/128527中公开的那些pd-l1结合性双环肽配体，所述文献中的每一个的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0294]
在一些实施方案中，pd-l1结合性双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0295]ci
sagwltmc
ii
qklhlc
iii
(seq id no:52)；
[0296]ci
sagwltmc
ii
q[k(pya)]lhlc
iii
(seq id no:53)；
[0297]ci
skgwltmc
ii
q[k(ac)]lhlc
iii
(seq id no:54)；
[0298]ci
sagwltkc
ii
q[k(ac)]lhlc
iii
(seq id no:55)；
[0299]ci
sagwltmc
ii
k[k(ac)]lhlc
iii
(seq id no:56)；
[0300]ci
sagwltmc
ii
q[k(ac)]lklc
iii
(seq id no:57)；
[0301]ci
sagwltmc
ii
q[harg]lhlc
iii
(seq id no:58)；和
[0302]ci
sagwltmc
ii
[harg]qlnlc
iii
(seq id no:59)；
[0303]
其中ci、c
ii
和c
iii
分别表示第一(i)、第二(ii)和第三(iii)半胱氨酸基团，pya表示4-戊炔酸，harg表示高精氨酸。
[0304]
在一些实施方案中，pd-l1结合性双环肽配体任选地包含n端和/或c端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0305]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-sdk-(seq id no:52)(本文称为bcy10043)；
[0306]
ac-d-[harg]-(seq id no:52)-psh(本文称为bcy11865)；
[0307]
ac-sdk-(seq id no:53)(本文称为bcy11013)；
[0308]
ac-sdk-(seq id no:53)-psh(本文称为bcy10861)；
[0309]
ac-d-[harg]-(seq id no:54)-psh(本文称为bcy11866)；
[0310]
ac-d-[harg]-(seq id no:55)-psh(本文称为bcy11867)；
[0311]
ac-d-[harg]-(seq id no:56)-psh(本文称为bcy11868)；
[0312]
ac-d-[harg]-(seq id no:57)-psh(本文称为bcy11869)；
[0313]
ac-sd-[harg]-(seq id no:58)-pshk(本文称为bcy12479)；和
[0314]
ac-sd-[harg]-(seq id no:59)-pshk(本文称为bcy12477)；
[0315]
其中pya表示4-戊炔酸，b-ala表示β-丙氨酸，sar
10
表示10个肌氨酸单元，harg表示高精氨酸。
[0316]
在一些实施方案中，pd-l1结合性双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0317]ci
[harg]dwc
ii
hwtfshghpc
iii
(seq id no:82)；
[0318]ci
sagwltmc
ii
qklhlc
iii
(seq id no:52)；和
[0319]ci
sagwltmc
ii
q[k(pya)]lhlc
iii
(seq id no:53)；
[0320]
其中ci、c
ii
和c
iii
分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基，harg表示高精氨酸，pya表示4-戊炔酸。
[0321]
在一些实施方案中，pd-l1结合性双环肽配体包含n端和/或c端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0322]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-(seq id no:82)(下文称为bcy8938)；
[0323]
[pya]-[b-ala]-[sar
10
]-sdk-(seq id no:52)(下文称为bcy10043)；
[0324]
nh
2-sdk-(seq id no:52)-[sar
10
]-[k(pya)](下文称为bcy10044)；
[0325]
nh
2-sdk-(seq id no:53)(下文称为bcy10045)；和
[0326]
ac-sdk-(seq id no:53)-psh(下文称为bcy10861)；
[0327]
其中pya表示4-戊炔酸，b-ala表示β-丙氨酸，sar
10
表示10个肌氨酸单元。
[0328]
在一些实施方案中，癌细胞上存在的组分为前列腺特异性膜抗原(psma)。
[0329]
前列腺特异性膜抗原(psma)(亦称为谷氨酸羧肽酶ii(gcpii)、n-乙酰基-l-天冬胺酰基-l-谷氨酸肽酶i(naalad酶i)和naag肽酶)为在人类中由folh1(叶酸羟化酶1)基因编码的酶。人类gcpii含有750个氨基酸并且大约84kda重。
[0330]
人类psma高度表达在前列腺中，比在大多数其他组织中高大约一百倍。在一些前列腺癌中，psma为上调第二多的基因产物，其中比非癌性前列腺细胞中的水平增加8倍至12倍。由于该高表达，psma经研发作为用于一些癌症的疗法和成像的潜在生物标记物。在人类前列腺癌中，更高表达的肿瘤与更快的进展时间和更大百分比的遭受复发的患者相关。
[0331]
在一些实施方案中，第一肽配体包含psma结合性双环肽配体。
[0332]
在一些实施方案中，psma结合性双环肽配体选自wo2019/243455和wo2020/120980中公开的那些psma结合性双环肽配体，所述文献中的每一个的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0333]
在一些实施方案中，癌细胞上存在的组分为膜1型金属蛋白酶(mt1-mmp)。
[0334]
在一些实施方案中，第一肽配体包含mt1-mmp结合性双环肽配体。
[0335]
在一些实施方案中，mt1-mmp结合性双环肽配体选自wo2016/067035、wo2017/191460和wo2018/115204中公开的那些mt1-mmp结合性双环肽配体，所述文献中的每一个的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0336]
cd137结合性肽配体
[0337]
cd137为肿瘤坏死因子(tnf)受体家族的成员。其替代名称为肿瘤坏死因子受体超家族成员9(tnfrsf9)、4-1bb，且由淋巴细胞活化(ila)诱导。cd137可由活化t细胞表达，但其程度在cd8 t细胞上比在cd4 t细胞上更大。另外，cd137表达发现于树突细胞、滤泡性树突细胞、自然杀伤细胞、粒细胞和炎症部位处的血管壁细胞上。cd137的一种特征化活性为其对活化t细胞的共刺激活性。cd137的交联增强t细胞增殖、il-2分泌、存活期和细胞溶解活性。此外，其可增强免疫活性以消除小鼠中的肿瘤。
[0338]
cd137为在tcr活化时诱导的t细胞共刺激受体(nam等人，curr.cancer drug targets,5:357-363(2005)；waits等人，annu.rev,immunol.,23:23-68(2005))。除其在活化cd4 和cd8 t细胞上的表达外，cd137也在cd4 cd25 调节性t细胞、自然杀伤(nk)和nk-t细胞、单核细胞、嗜中性细胞和树突细胞上表达。其天然配体cd137l已记载出现在包括b细胞、单核细胞/巨噬细胞和树突细胞的抗原呈递细胞上(watts等人，annu.rev.immunol,23:23-68(2005))。在与其配体相互作用时，cd137引起增加的tcr诱导的t细胞增殖、细胞因子产生、功能成熟和延长的cd8 t细胞存活期(nam等人，cancer drug targets,5:357-363(2005),watts等人，annu.rev.immunol,23:23-68(2005))。
[0339]
通过cd137经由cd137l或抗cd137的激动性单克隆抗体(mab)进行信号传导引起增加的tcr诱导的t细胞增殖、细胞因子产生和功能成熟以及延长的cd8 t细胞存活期。这些影响由以下引起：(1)nf-κb、c-jun nh2-末端激酶/应激活化蛋白激酶(jnk/sapk)和p38丝裂原活化蛋白激酶(mapk)信号传导路径的活化，和(2)抗细胞凋亡与细胞周期相关基因表达的控制。
[0340]
在cd137缺陷小鼠和cd137l缺陷小鼠两者中进行的实验已另外显示cd137共刺激在产生完全胜任型t细胞反应中的重要性。
[0341]
il-2和il-15活化的nk细胞表达cd137，并且激动性mab与cd137的连接刺激nk细胞增殖和ifn-γ分泌，但不刺激其细胞溶解活性。
[0342]
此外，cd137刺激的nk细胞促进体外活化的t细胞的扩增。
[0343]
根据其共刺激功能，已展示抗cd137的激动性mab促进心脏和皮肤同种异体移植排异反应，根除已建立的肿瘤，扩展初级抗病毒cd8 t细胞反应，且增加t细胞细胞溶解潜力。这些研究支持cd137信号传导促进t细胞功能(这可以增强对肿瘤和感染的免疫力)的观点。
[0344]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，所述cd137结合性肽配体中的两个或更多个具有相同的肽序列。在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，所述cd137结合性肽配体中的两个或更多个具有不同的肽序列。在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，所述cd137结合性肽配体中的两个或更多个是相同的。在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，所述cd137结合性肽配体中的两个或更多个是不同的。
[0345]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含一个cd137结合性肽配体的情况下，所述cd137结合性肽配体为cd137结合性双环肽配体。在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，所述cd137结合性肽配体中的两个或更多个为cd137结合性双环肽配体。
[0346]
在一些实施方案中，cd137结合性双环肽配体选自wo2019/025811中公开的那些
cd137结合性双环肽配体。在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含一个cd137结合性肽配体的情况下，所述cd137结合性肽配体为选自wo2019/025811中公开的那些的cd137结合性双环肽配体。在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，所述cd137结合性双环肽配体中的两个或更多个独立地选自wo2019/025811中公开的那些cd137结合性双环肽配体。wo2019/025811的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0347]
在一些实施方案中，cd137结合性双环肽配体包含以下氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0348]ci
ieegqyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:5)；
[0349]ci
[tbuala]pe[d-ala]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:6)；
[0350]ci
ieegqyc
ii
f[d-ala]dpy[nle]c
iii
(seq id no:7)；
[0351]ci
[tbuala]pk[d-ala]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:8)；
[0352]ci
[tbuala]pe[d-lys]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:9)；
[0353]ci
[tbuala]p[k(pya)][d-ala]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:10)；
[0354]ci
[tbuala]pe[d-lys(pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:11)；
[0355]ci
iee[d-lys(pya)]qyc
ii
fadpy(nle)c
iii
(seq id no:12)；
[0356]ci
[tbuala]pe[dk]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:60)；
[0357]ci
iee[dk(pya)]qyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:61)；
[0358]ci
[tbuala]ee(dk)pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:62)；
[0359]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:63)；
[0360]ci
[tbuala]ee[dk(pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:64)；
[0361]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fanpy[nle]c
iii
(seq id no:65)；
[0362]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
faepy[nle]c
iii
(seq id no:66)；
[0363]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fa[aad]py[nle]c
iii
(seq id no:67)；
[0364]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
faqpy[nle]c
iii
(seq id no:68)；
[0365]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fadpy[nle][cysam]
iii
(seq id no:69)；
[0366]
[merpro]i[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:70；本文中称为bcy12353)；
[0367]
[merpro]i[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fadpy[nle][cysam]
iii
(seq id no:71；本文中称为bcy12354)；
[0368]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:72)；
[0369]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:73)；
[0370]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:74；本文中称为bcy12372)；
[0371]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fad[nmeala]y[nle]c
iii
(seq id no:75)；
[0372]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fad[nmedala]y[nle]c
iii
(seq id no:76)；ci[tbuala]p[k(pya)][da]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:77)；
[0373]ci
[tbuala]pe[dk(pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:78)；
[0374]ci
[tbuala]pe[dk(me,pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:79)；
[0375]ci
[tbuala]pe[dk(me,pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:80)；和
[0376]
[merpro]i[tbuala]ee[dk]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:81；本文中称为bcy13137)；
[0377]
其中[merpro]i、ci、c
ii
、c
iii
和[cysam]
iii
表示选自半胱氨酸、merpro和cysam的第一(i)、第二(ii)和第三(iii)反应性基团，nle表示正亮氨酸，tbuala表示叔丁基-丙氨酸，pya表示4-戊炔酸，aad表示α-l-氨基己二酸，merpro表示3-巯基丙酸，cysam表示半胱胺，nmeala表示n-甲基-丙氨酸。
[0378]
在一些实施方案中，cd137结合性双环肽配体包含以下氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0379]ci
ieegqyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:5)；
[0380]ci
[tbuala]pe[d-ala]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:6)；
[0381]ci
ieegqyc
ii
f[d-ala]dpy[nle]c
iii
(seq id no:7)；
[0382]ci
[tbuala]pk[d-ala]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:8)；
[0383]ci
[tbuala]pe[d-lys]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:9)；
[0384]ci
[tbuala]p[k(pya)][d-ala]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:10)；
[0385]ci
[tbuala]pe[d-lys(pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:11)；和
[0386]ci
iee[d-lys(pya)]qyc
ii
fadpy(nle)c
iii
(seq id no:12)；
[0387]
其中ci、c
ii
和c
iii
分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基，nle表示正亮氨酸，tbuala表示叔丁基-丙氨酸，pya表示4-戊炔酸。
[0388]
在一些实施方案中，cd137结合性双环肽配体包含以下氨基酸序列或其医药学上可接受的盐：
[0389]ci
[tbuala]pe[d-lys(pya)]pyc
ii
fadpy[nle]c
iii
(seq id no:11)；
[0390]
其中ci、c
ii
和c
iii
分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基，tbuala表示叔丁基-丙氨酸，pya表示4-戊炔酸，nle表示正亮氨酸。
[0391]
在一些实施方案中，cd137结合性双环肽配体包含n端和c端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0392]
ac-a-(seq id no:5)-dap(本文中称为bcy7732)；
[0393]
ac-a-(seq id no:5)-dap(pya)(本文中称为bcy7741)；
[0394]
ac-(seq id no:6)-dap(本文中称为bcy9172)；
[0395]
ac-(seq id no:6)-dap(pya)(本文中称为bcy11014)；
[0396]
ac-a-(seq id no:7)-dap(本文中称为bcy8045)；
[0397]
ac-(seq id no:8)-a(本文中称为bcy8919)；
[0398]
ac-(seq id no:9)-a(本文中称为bcy8920)；
[0399]
ac-(seq id no:10)-a(本文中称为bcy8927)；
[0400]
ac-(seq id no:11)-a(本文中称为bcy8928)；
[0401]
(seq id no:11)-a(本文中称为bcy14601)；
[0402]
ac-a-(seq id no:12)-a(本文中称为bcy7744)；
[0403]
ac-(seq id no:60)-dap(pya)(本文中称为bcy11144)；
[0404]
ac-a-(seq id no:61)-k(本文中称为bcy11613)；
[0405]
ac-(seq id no:62)-dap(pya)(本文中称为bcy12023)；
[0406]
ac-(seq id no:63)(本文中称为bcy12149)；
[0407]
ac-(seq id no:64)(本文中称为bcy12143)；
[0408]
ac-(seq id no:65)(本文中称为bcy12147)；
[0409]
ac-(seq id no:66)(本文中称为bcy12145)；
[0410]
ac-(seq id no:67)(本文中称为bcy12146)；
[0411]
ac-(seq id no:68)(本文中称为bcy12150)；
[0412]
ac-(seq id no:69)(本文中称为bcy12352)；
[0413]
ac-(seq id no:72)-[1,2-二氨基乙烷](本文中称为bcy12358)；
[0414]
[棕榈酸]-[yglu]-[yglu]-(seq id no:73)(本文中称为bcy12360)；
[0415]
ac-(seq id no:75)(本文中称为bcy12381)；
[0416]
ac-(seq id no:76)(本文中称为bcy12382)；
[0417]
ac-(seq id no:77)-k(本文中称为bcy12357)；
[0418]
ac-(seq id no:78)-[da](本文中称为bcy13095)；
[0419]
[ac]-(seq id no:78)-k(本文中称为bcy13389)；
[0420]
ac-(seq id no:79)-[da](本文中称为bcy13096)；和
[0421]
ac-(seq id no:80)(本文中称为bcy13097)；
[0422]
其中ac表示乙酰基，dap表示二氨基丙酸，pya表示4-戊炔酸。
[0423]
在一些实施方案中，cd137结合性双环肽配体包含n端和c端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0424]
ac-a-(seq id no:5)-dap(本文中称为bcy7732)；
[0425]
ac-a-(seq id no:5)-dap(pya)(本文中称为bcy7741)；
[0426]
ac-(seq id no:6)-dap(本文中称为bcy9172)；
[0427]
ac-(seq id no:6)-dap(pya)(本文中称为bcy11014)；
[0428]
ac-a-(seq id no:7)-dap(本文中称为bcy8045)；
[0429]
ac-(seq id no:8)-a(本文中称为bcy8919)；
[0430]
ac-(seq id no:9)-a(本文中称为bcy8920)；
[0431]
ac-(seq id no:10)-a(本文中称为bcy8927)；
[0432]
ac-(seq id no:11)-a(本文中称为bcy8928)；
[0433]
ac-a-(seq id no:12)-a(本文中称为bcy7744)；
[0434]
其中ac表示乙酰基，dap表示二氨基丙酸，pya表示4-戊炔酸。
[0435]
在一些实施方案中，cd137结合性双环肽配体包含n端和c端修饰并且包含以下或其医药学上可接受的盐：
[0436]
ac-(seq id no:11)-a(本文中称为bcy8928)；
[0437]
其中ac表示乙酰基。
[0438]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，所述两个或更多个cd137结合性肽配体中的每一个具有相同的肽序列并且该肽序列包含ac-(seq id no:11)-a(本文中称为bcy8928)或其医药学上可接受的盐，其中ac表示乙酰基。
[0439]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个cd137结合性肽配体的情况下，所述两个cd137结合性肽配体两者具有相同的肽序列，该肽序列包含ac-(seq id no:11)-a(本文中称为bcy8928)或其医药学上可接受的盐，其中ac表示乙酰基。
[0440]
接头
[0441]
包含两个或更多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物
[0442]
将了解，第一肽配体可经由任何适合的接头与两个或更多个第二肽配体缀合。通常，该接头的设计将使得三个双环肽以使其在单独或在同时结合两个靶标受体时能够不受妨碍地结合其各自靶标的方式呈现。另外，接头应准许同时结合两个靶标，同时维持靶标细胞之间的适当距离，这将产生所需功能结果。接头的特性可经调节以增加长度、刚度或溶解度，以优化所需功能结果。接头也可经设计以准许超过一个双环连接至相同靶标。增加任一结合肽的价数可用以增加杂串联物对靶标细胞的亲和力或可有助于诱导靶标受体中的一个或两个的寡聚合。
[0443]
在一些实施方案中，接头为分支接头，以允许一个第一肽位于一个末端处且两个或更多个第二肽位于另一末端处。
[0444]
在一些实施方案中，分支接头选自：
[0445][0446]
n-(酸-peg3)-n-双(peg
3-叠氮化物)；
[0447][0448]
均苯三酸-[peg
10
]3；
[0449][0450]
tca-[peg
10
]3；
[0451][0452]
tet-[peg
10
]4；和
[0453][0454]
bapg-(peg5)2。
[0455]
在一些实施方案中，分支接头为：
[0456][0457]
n-(酸-peg3)-n-双(peg
3-叠氮化物)。
[0458]
包含一个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物
[0459]
将了解，第一肽配体可经由任何适合的接头与第二肽配体缀合。通常，所述接头的设计将使得两个双环肽以使其在单独或在同时结合两个靶标受体时能够不受妨碍地结合其各自靶标的方式呈现。另外，接头应准许同时结合两个靶标，同时维持靶标细胞之间的适当距离，这将产生所需功能结果。接头的特性可经调节以增加长度、刚度或溶解度，以优化所需功能结果。接头也可经设计以准许超过一个双环连接至相同靶标。增加任一结合肽的价数可用以增加杂串联物对靶标细胞的亲和力或可有助于诱导靶标受体中的一个或两个的寡聚合。
[0460]
在一个实施方案中，接头选自以下序列：-peg5-和tca-[peg
10
]3。
[0461]
这些接头的结构示意图详见下文：
[0462][0463]-peg5-；和
[0464][0465]
tca-[peg
10
]3。
[0466]
在一些实施方案中，接头选自以下序列：-ch
2-、-peg
5-、-peg
10-、-peg
12-、-peg
23-、-peg
24-、-peg
15-sar
5-、-peg
10-sar
10-、-peg
5-sar
15-、-peg
5-sar
5-、-b-ala-sar
20-、-b-ala-sar
10-peg
10-、-b-ala-sar
5-peg
15-和-b-ala-sar
5-peg
5-。
[0467]
在一些实施方案中，接头选自以下：
[0468]
[0469][0470]
杂串联双环肽复合物
[0471]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，第一肽配体包含连接至tata骨架的柄蛋白-4结合性双环肽配体，两个或更多个cd137结合性双环肽配体中的每一个连接至tata骨架，并且所述杂串联双环肽复合物选自表a中所列出的复合物：
[0472]
表a(柄蛋白-4：cd137；1:2)
[0473]
[0474][0475]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自：bcy11027、bcy11863和bcy11864。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自：bcy11863和bcy11864。
[0476]
杂串联双环肽复合物bcy11863(亦称为bt7480)由以下组成：经由n-(酸-peg3)-n-双(peg
3-叠氮化物)接头连接至两个cd137特异性肽(两者均为bcy8928)的柄蛋白-4特异性肽bcy8116，其图示为：
[0477][0478]
cd137为同源三聚蛋白且天然配体cd137l以表达在免疫细胞上或所分泌的同源三聚体形式存在。cd137的生物学高度依赖于多聚化以诱导免疫细胞中的cd137活性。产生
cd137多聚化的一种方式为经由cd137特异性激动剂通过与另一细胞上所存在的特异性受体的相互作用进行细胞交联。本发明的杂串联复合物的优点在于：对免疫细胞组分(诸如cd137)具有特异性的两个或更多个肽配体的存在提供了更有效的cd137群聚。例如，已发现，bcy11863显示较强的cd137活化且诱导稳健的il-2和ifn-γ细胞因子分泌，并且bcy11863显示具有在sd大鼠中为4.1小时且在食蟹猴(cyno)中为5.3小时的终末半衰期的极佳pk概况。
[0479]
杂串联双环肽复合物bcy11027由以下组成：经由tca-[peg
10
]3接头连接至两个cd137特异性肽(两者均为bcy8928)的柄蛋白-4特异性肽bcy11015，其图示为：
[0480][0481]
已发现，柄蛋白-4/cd137杂串联bcy11027诱导原发性患者来源的肺肿瘤的离体培
养物中的靶标依赖性细胞因子释放，且诱导患者来源的样品中与柄蛋白-4表达水平相关的一些免疫标记物(针对媒介物标准化)和cd8 ki67 t细胞％的柄蛋白-4依赖性变化。
[0482]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，第一肽配体包含连接至tata骨架的柄蛋白-4结合性双环肽配体，两个或更多个cd137结合性双环肽配体中的每一个连接至tata骨架，并且所述杂串联双环肽复合物选自表b中所列出的复合物：
[0483]
表b(柄蛋白-4:cd137；1:3)
[0484][0485]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，第一肽配体包含连接至tata骨架的epha2结合性双环肽配体，两个或更多个cd137结合性双环肽配体中的每一个连接至tata骨架，并且所述杂串联双环肽复合物选自表c中所列出的复合物：
[0486]
表c(epha2：cd137；1:2)
[0487]
[0488]
[0489]
[0490][0491]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自：bcy12491、bcy12730、bcy13048、bcy13050、bcy13053和bcy13272。
[0492]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自：bcy12491、bcy12730、bcy13048、bcy13050和bcy13053。
[0493]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物为bcy12491。
[0494]
杂串联双环肽复合物bcy12491由以下组成：经由n-(酸-peg3)-n-双(peg
3-叠氮化物)接头连接至两个cd137特异性肽(两者均为bcy8928)的epha2特异性肽bcy9594，其图示为：
[0495][0496]
已发现，bcy12491引起显著的抗肿瘤反应和肿瘤浸润性免疫细胞和免疫反应的调控(增加)。
[0497]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物为bcy13272。
[0498]
杂串联双环肽复合物bcy13272由以下组成：经由n-(酸-peg3)-n-双(peg
3-叠氮化物)接头连接至两个cd137特异性肽(两者均为bcy8928)的epha2特异性肽bcy13118，其图示为：
[0499][0500]
已发现，bcy13272引起小鼠中的mc38肿瘤模型中的显著抗肿瘤作用。
[0501]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含两个或更多个cd137结合性肽配体的情况下，第一肽配体包含连接至tata骨架的pd-l1结合性双环肽配体，两个或更多个
cd137结合性双环肽配体中的每一个连接至tata骨架，并且所述杂串联双环肽复合物选自表d中所列出的复合物：
[0502]
表d(pd-l1：cd137；1:2)
[0503][0504]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含一个cd137结合性肽配体的情况下，第一肽配体包含连接至tata骨架的pd-l1结合性双环肽配体，所述一个cd137结合性肽配体连接至tata骨架，并且所述杂串联双环肽复合物选自表e中所列出的复合物：
[0505]
表e(pd-l1：cd137；1:1)
[0506][0507]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自：bcy12375和bcy12021。
[0508]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含一个cd137结合性肽配体的情况下，第一肽配体包含连接至tata骨架的pd-l1结合性双环肽配体，所述一个cd137结合性肽配体连接至tata骨架，并且所述杂串联双环肽复合物选自表e-2中所列出的复合物：
[0509]
表e-2(pd-l1：cd137；1:1)
[0510][0511]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含一个cd137结合性肽配体的情况下，第一肽配体包含连接至tata骨架的epha2结合性双环肽配体，所述一个cd137结合性肽配体连接至tata骨架，并且所述杂串联复合物选自表f中所列出的复合物：
[0512]
表f(epha2：cd137；1:1)
[0513]
[0514]
[0515][0516]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自：bcy13035、bcy13040、bcy13253、bcy13254、bcy13340和bcy13342。
[0517]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含一个cd137结合性肽配体的情况下，第一肽配体包含连接至tata骨架的epha2结合性双环肽配体，所述一个cd137结合性肽配体连接至tata骨架，并且所述杂串联复合物选自表f-2中所列出的复合物：
[0518]
表f-2(epha2：cd137；1:1)
[0519][0520]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物为bcy7985，其中cd137特异性肽bcy7859经由peg
12
连接至epha2特异性肽bcy6169的n端pya基团：
[0521][0522]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含一个cd137结合性肽配体的情况下，第一肽配体包含连接至tata骨架的柄蛋白-4结合性双环肽配体，所述一个cd137结合性肽配体连接至tata骨架，并且所述杂串联复合物选自表g中所列出的复合物：
[0523]
表g(柄蛋白-4：cd137；1:1)
[0524]
[0525][0526]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自：bcy11468、bcy11618、bcy11776、bcy11860、bcy12020、bcy12661和bcy12969。
[0527]
在一些实施方案中，在杂串联双环肽复合物包含一个cd137结合性肽配体的情况下，第一肽配体包含连接至tata骨架的柄蛋白-4结合性双环肽配体，所述一个cd137结合性肽配体连接至tata骨架，并且所述杂串联复合物选自表g-2中所列出的复合物：
[0528]
表g-2(柄蛋白-4：cd137；1:1)
[0529]
[0530][0531]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自美国专利申请17/062,662中公开的那些杂串联双环肽复合物，该美国专利申请的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0532]
在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物选自美国专利公开20190307836中公开的那些杂串联双环肽复合物，该美国专利公开的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0533]
除非另外定义，否则本文中所使用的所有技术和科学术语均具有与本领域中(诸如肽化学、细胞培养和噬菌体展示、核酸化学和生物化学的领域中)普通技术人员通常所理解相同的含义。标准技术用于分子生物学、遗传学和生物化学方法(参见sambrook等人，molecular cloning:a laboratory manual,第3版,2001,cold spring harbor laboratory press,cold spring harbor,ny；ausubel等人，short protocols in molecular biology(1999)第4版,john wiley&sons,inc.)，这些以引用的方式并入本文中。
[0534]
命名
[0535]
编号
[0536]
当提及本发明的化合物内的氨基酸残基位置时，半胱氨酸残基(ci、c
ii
和c
iii
)自编号中省略，因为它们是不变的，因此，seq id no:1内的氨基酸残基的编号如下所示：
[0537]ci-p
1-1nal
2-dd
3-c
ii-m
4-harg
5-d
6-w
7-s
8-t
9-p
10-hyp
11-w
12-c
iii
(seq id no:1)。
[0538]
出于本说明书的目的，假定所有双环肽用tbmb(1,3,5-三(溴甲基)苯)或1,1',1
”‑
(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮(tata)环化并且产生三取代的结构。用tbmb和tata进行的环化发生在ci、c
ii
和c
iii
上。
[0539]
分子形式
[0540]
将双环核心序列的n端或c端延伸部分添加至序列的左侧或右侧，由连字符隔开。例如，n端βala-sar10-ala尾部将表示为：
[0541]
βala-sar10-a-(seq id no:x)。
[0542]
反向肽序列
[0543]
鉴于nair等人(2003)j immunol 170(3),1362-1373中的公开内容，设想本文中所公开的肽序列也将以其反向-翻转形式(retro-inverso form)发现效用。例如，序列反向(即，n端变为c端，且反之亦然)并且其立体化学也同样反向(即d-氨基酸变为l-氨基酸，且反之亦然)。为避免疑问，除非另外陈述，否则以其全称或以其氨基酸单字母代码或三字母代码形式对氨基酸的提及在本文中意欲表示l-氨基酸。如果该氨基酸意欲表示为d-氨基酸，则该氨基酸将在方括号内以小写字母d开头，例如[da]、[dd]、[de]、[dk]、[d1nal]、[dnle]等。
[0544]
肽配体的优点
[0545]
本发明的某些杂串联双环肽复合物具有许多有利特性，这些有利特性使其能够被视为用于注射、吸入、经鼻、经眼、经口或局部施用的合适药物样分子。此类有利特性包括：
[0546]-物种交叉反应性。这是临床前药效学和药物动力学评估的典型要求；
[0547]-蛋白酶稳定性。杂串联双环肽复合物应理想上显示对血浆蛋白酶、上皮(“膜锚定的”)蛋白酶、胃中的蛋白酶和肠中的蛋白酶、肺表面的蛋白酶、胞内蛋白酶及其类似物的稳定性。应在不同物种之间维持蛋白酶稳定性，以使得可在动物模型中研发杂串联双环肽主要候选物以及放心地施用至人类；
[0548]-所需溶解度概况。这是带电残基和亲水性残基与疏水性残基的比例以及分子内/分子间h键的函数，对于配制和吸收目的至关重要；
[0549]-选择性。本发明的某些杂串联双环肽复合物显示优于其他靶标的良好选择性；
[0550]-在循环中的最佳血浆半衰期。取决于临床适应证和治疗方案，可能需要研发用于短期暴露于急性疾病管理环境中的杂串联双环肽复合物，或研发在循环中具有增强的保留率且因此最佳用于管理更多慢性疾病状态的杂串联双环肽复合物。驱动所需血浆半衰期的其他因素为对最大治疗效率的持续暴露的要求相对于由于药剂的持续暴露而伴随的毒理学。
[0551]
关键地，本文中呈现数据，其中所选杂串联双环肽复合物在以不维持高于化合物的体外ec
50
的血浆浓度的频率给药时显示抗肿瘤功效。这与cd137激动性作用或双特异性cd137激动性作用的更大重组生物(即基于抗体)方法形成对比(segal等人,clin cancer res.,23(8):1929-1936(2017),claus等人,sci trans med.,11(496):eaav5989,1-12(2019),hinner等人,clin cancer res.,25(19):5878-5889(2019))。不受理论束缚，认为
这一观察结果的原因是由于以下事实：杂串联双环复合物具有相对较低的分子量(通常＜15kda)，其为完全合成的且其为cd137的肿瘤靶向激动剂。因此，杂串联双环复合物具有相对较短的血浆半衰期，但具有良好的肿瘤外显率(tumor penetrance)和保持率。本文记载了充分支持这些优点的数据。例如，每天或每3天显示具有人源化cd137的小鼠中的同基因型啮齿动物模型中的抗肿瘤功效。另外，腹膜内药物动力学数据显示，血浆半衰期＜3小时，这预测在各次剂量给药之间复合物的循环浓度将持续下降至低于体外ec
50
。此外，肿瘤药物动力学数据显示，与血浆水平相比，肿瘤组织中的杂串联双环复合物的水平可能更高且更持久。
[0552]
将了解，这一观察结果形成本发明的另一重要方面。因此，根据本发明的另一方面，提供一种治疗癌症的方法，其包括以不保持高于所述复合物的体外ec
50
的所述复合物的血浆浓度的给药频率施用如本文中所定义的杂串联双环肽复合物。
[0553]-免疫记忆。使癌细胞结合性双环肽配体与免疫细胞结合性双环肽配体偶联提供免疫记忆的协同优点。本文中记载的数据显示本发明的所选杂串联双环肽复合物不仅根除肿瘤，而且在再施用致瘤剂时，已接种的完全响应小鼠中无一发展肿瘤(参见图5)。这表明用本发明所选的杂串联双环肽复合物进行治疗已在完全响应小鼠中诱导免疫原性记忆。这具有显著的临床优点，从而在肿瘤已开始得到控制和根除后预防所述肿瘤复发。
[0554]
肽配体
[0555]
如本文中所提及，肽配体是指共价结合于分子骨架的肽。通常，此类肽包含能够形成与骨架的共价键的两个或更多个反应性基团(即，半胱氨酸残基)和在所述反应性基团之间所对的序列，该序列由于其在肽结合于骨架时形成环而被称为环序列。在当前情况下，肽包含选自半胱氨酸、3-巯基丙酸和/或半胱胺的至少三个反应性基团并且在骨架上形成至少两个环。
[0556]
反应性基团
[0557]
本发明的分子骨架可经由多肽上的官能团或反应性基团结合于多肽。这些通常由在多肽聚合物中存在的特定氨基酸的侧链形成。此类反应性基团可为半胱氨酸侧链、赖氨酸侧链或n端胺基或任何其他适合的反应性基团，诸如青霉胺。适合的反应性基团的详情可见于wo2009/098450。
[0558]
天然氨基酸的反应性基团的实例为半胱氨酸的硫醇基、赖氨酸的氨基、天冬氨酸或谷氨酸的羧基、精氨酸的胍基、酪氨酸的酚基或丝氨酸的羟基。非天然氨基酸可提供广泛范围的反应性基团，包括叠氮化物、酮-羰基、炔烃、乙烯基或芳基卤基。多肽末端的氨基和羧基也可充当反应性基团以形成与分子骨架/分子核心的共价键。
[0559]
本发明的多肽含有至少三个反应性基团。所述多肽也可含有四个或更多个反应性基团。所使用的反应性基团越多，可在分子骨架中形成的环越多。
[0560]
在一个优选的实施方案中，产生具有三个反应性基团的多肽。所述多肽与具有三倍旋转对称性的分子骨架/分子核心的反应产生单一产物异构体。单一产物异构体的产生出于一些原因而是有利的。化合物库的核酸仅编码多肽的一级序列，而非在多肽与分子核心反应时形成的分子的异构状态。如果仅可形成一种产物异构体，则明确定义核酸向产物异构体的分配。如果形成多种产物异构体，则核酸不能给出关于在筛选或选择程序中分离的产物异构体的性质的信息。如果能够合成本发明的特定库成员，则单一产物异构体的形
成也是有利的。在此情况下，多肽与分子骨架的化学反应产生单一产物异构体而非多种异构体的混合物。
[0561]
在另一实施方案中，产生具有四个反应性基团的多肽。所述多肽与具有四面体对称性的分子骨架/分子核心的反应产生两种产物异构体。即使这两种不同的产物异构体由一种相同的核酸编码，也可以通过化学合成两种异构体、分离两种异构体和测试两种异构体与靶标配体的结合来测定经分离的异构体的异构性质。
[0562]
在本发明的一个实施方案中，多肽的反应性基团中的至少一个与剩余反应性基团正交。使用正交反应性基团允许将所述正交反应性基团引导至分子核心的特定位点。涉及正交反应性基团的连接策略可用于限制所形成产物异构体的数目。换言之，通过针对至少三个键中的一个或多个选择与针对至少三个键的剩余部分选择的反应性基团相异或不同的反应性基团，可有效实现将多肽的特定反应性基团结合或引导至分子骨架上的特定位置的特定次序。
[0563]
在另一实施方案中，使本发明的多肽的反应性基团与分子接头反应，其中所述接头能够与分子骨架反应以使得接头将以最终键合状态插入于分子骨架与多肽之间。
[0564]
在一些实施方案中，库成员或多肽集合的氨基酸可经任何天然或非天然氨基酸置换。从这些可交换氨基酸中排除携带用于使多肽与分子核心交联的官能团的氨基酸，使得仅环序列为可交换的。可交换的多肽序列具有随机序列、恒定序列或具有随机和恒定氨基酸的序列。由于具有反应性基团的氨基酸的位置决定环大小，所以这些氨基酸位于多肽内的所定义位置中。
[0565]
在一个实施方案中，具有三个反应性基团的多肽具有序列(x)
l
y(x)my(x)ny(x)o，其中y表示具有反应性基团的氨基酸，x表示随机氨基酸，m和n为限定插入多肽区段的长度的3与6之间的数字(其可相同或不同)，且l和o为限定侧接多肽区段的长度的0与20之间的数字。
[0566]
硫醇介导的结合的替代方案可用于经由共价相互作用将分子骨架连接至肽。备选地，这些技术可用于在已根据本发明选择或分离其他部分(诸如不同于分子骨架的所关注小分子)之后将所述其他部分修饰或连接至多肽，在此实施方案中，接着清楚地，连接不必为共价的且可涵盖非共价连接。通过产生展示携带具有必备化学反应性基团的非天然氨基酸的蛋白和肽以及携带互补反应性基团的小分子的噬菌体，或通过在选择/分离阶段之后形成分子时将非天然氨基酸掺入化学或重组合成多肽中，可使用这些方法代替硫醇介导的方法(或与其组合)。进一步的详情可见于wo2009/098450或heinis等人，nat chem biol 2009,5(7),502-7中。
[0567]
在一些实施方案中，反应性基团选自半胱氨酸、3-巯基丙酸和/或半胱胺残基。
[0568]
医药学上可接受的盐
[0569]
将了解，盐形式在本发明的范畴内，并且对肽配体的提及包括所述配体的盐形式。
[0570]
本发明的盐可由含有碱性或酸性部分的母体化合物经由常规化学方法来合成，常规化学方法诸如在pharmaceutical salts:properties,selection,and use,p.heinrich stahl(editor),camille g.wermuth(编),isbn:3-90639-026-8,hardcover,第388页,august 2002中所描述的方法。一般而言，此类盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与适当的碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备。
[0571]
酸加成盐(单盐或二盐)可由广泛多种酸(无机酸和有机酸两者)形成。酸加成盐的实例包括由选自由以下组成的组的酸形成的单盐或二盐：乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、褐藻酸、抗坏血酸(例如，l-抗坏血酸)、l-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰胺基苯甲酸、丁酸、( )樟脑酸、樟脑-磺酸、( )-(1s)-樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环己烷氨基磺酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙烷磺酸、2-羟基乙烷磺酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、d-葡糖酸、葡糖醛酸(例如，d-葡糖醛酸)、谷氨酸(例如，l-谷氨酸)、α-氧代戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢卤酸(例如，氢溴酸、盐酸、氢碘酸)、羟乙基磺酸、乳酸(例如，( )-l-乳酸、(
±
)-dl-乳酸)、乳糖酸、马来酸、苹果酸、(-)-l-苹果酸、丙二酸、(
±
)-dl-扁桃酸、甲烷磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、磷酸、丙酸、丙酮酸、l-焦谷氨酸、水杨酸、4-胺基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、鞣酸、( )-l-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、十一碳烯酸和戊酸，以及酰化氨基酸和阳离子交换树脂。
[0572]
一组特定的盐由自以下形成的盐组成：乙酸、盐酸、氢碘酸、磷酸、硝酸、硫酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、马来酸、苹果酸、羟乙基磺酸、反丁烯二酸、苯磺酸、甲苯磺酸、硫酸、甲烷磺酸(甲磺酸)、乙烷磺酸、萘磺酸、戊酸、丙酸、丁酸、丙二酸、葡糖醛酸和乳糖酸。一种特定盐为盐酸盐。另一种特定盐为乙酸盐。
[0573]
如果化合物为阴离子或具有可为阴离子的官能团(例如，-cooh可为-coo-)，则盐可由产生合适的阳离子的有机碱或无机碱形成。合适的无机阳离子的实例包括但不限于：碱金属离子，诸如li

、na

和k

；碱土金属阳离子，诸如ca
2
和mg
2
；和其他阳离子，诸如al
3
或zn

。合适的有机阳离子的实例包括但不限于：铵离子(即nh
4
)和经取代的铵离子(例如，nh3r

、nh2r
2
、nhr
3
、nr
4
)。一些合适的经取代的铵离子的实例为来源于以下的那些铵离子：甲胺、乙胺、二乙胺、丙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苯甲胺、苯基苯甲胺、胆碱、葡甲胺和缓血酸胺(tromethamine)，以及氨基酸，诸如赖氨酸和精氨酸。常见季铵离子的一个实例为n(ch3)
4
。
[0574]
在本发明的化合物含有胺官能团的情况下，这些化合物可根据技术人员所熟知的方法例如经由与烷化剂反应来形成季铵盐。此类季铵化合物在本发明的范畴内。
[0575]
经修饰的衍生物
[0576]
将了解，如本文中所定义的肽配体的经修饰的衍生物在本发明的范畴内。此类适合的经修饰的衍生物的实例包括一种或多种选自以下的修饰：n端和/或c端修饰；一个或多个氨基酸残基经一个或多个非天然氨基酸残基置换(诸如一个或多个极性氨基酸残基经一个或多个等排或等电子氨基酸置换；一个或多个非极性氨基酸残基经其他非天然等排或等电子氨基酸置换)；添加间隔基团；一个或多个氧化敏感性氨基酸残基经一个或多个抗氧化氨基酸残基置换；一个或多个氨基酸残基经丙氨酸置换、一个或多个l-氨基酸残基经一个或多个d-氨基酸残基置换；双环肽配体内的一个或多个酰胺键的n-烷基化；一个或多个肽键经替代键置换；肽主链长度修饰；一个或多个氨基酸残基的α-碳上的氢经另一化学基团取代；氨基酸(诸如半胱氨酸、赖氨酸、谷氨酸/天冬氨酸和酪氨酸)经适合的胺、硫醇、羧酸和酚反应性试剂修饰以便官能化所述氨基酸；和引入或置换氨基酸，所述氨基酸引入适用于官能化的正交反应性，例如携带叠氮化物或炔基的氨基酸，其允许分别用携带炔或叠氮化物的部分进行官能化。
[0577]
在一些实施方案中，经修饰的衍生物包含n端和/或c端修饰。在另一实施方案中，其中经修饰的衍生物包含使用适合的氨基反应性化学试剂进行的n端修饰和/或使用适合的羧基反应性化学试剂进行的c端修饰。在另一实施方案中，所述n端或c端修饰包含添加效应基团，包括但不限于细胞毒性剂、放射螯合剂或发色团。
[0578]
在一些实施方案中，经修饰的衍生物包含n端修饰。在另一实施方案中，n端修饰包含n端乙酰基。在该实施方案中，n端半胱氨酸基团(本文中称为ci的基团)在肽合成期间用乙酸酐或其他适当试剂封端，从而产生n端乙酰化的分子。该实施方案提供移除氨基肽酶的潜在识别点的优点并且避免双环肽降解的可能性。
[0579]
在一些实施方案中，n端修饰包含添加分子间隔基团，其有助于效应基团与其靶标的缀合并且保留双环肽对其靶标的效力。
[0580]
在一些实施方案中，经修饰的衍生物包含c端修饰。在另一实施方案中，c端修饰包含酰胺基。在该实施方案中，c端半胱氨酸基团(本文中称为c
iii
的基团)在肽合成期间合成为酰胺，从而产生c端酰胺化的分子。该实施方案提供移除羧肽酶的潜在识别点的优点并且减小双环肽蛋白水解降解的可能性。
[0581]
在一些实施方案中，经修饰的衍生物包含一个或多个氨基酸残基经一个或多个非天然氨基酸残基置换。在该实施方案中，可选择具有既不被降解蛋白酶识别也不对靶标效力具有任何不良影响的等排/等电子侧链的非天然氨基酸。
[0582]
备选地，可使用具有受限氨基酸侧链的非天然氨基酸，使得邻近肽键的蛋白水解在构象和空间上受阻。具体地，这涉及脯氨酸类似物、庞大侧链、cα二取代的衍生物(例如，氨基异丁酸aib)和环氨基酸，作为氨基-环丙基羧酸的简单衍生物。
[0583]
在一些实施方案中，经修饰的衍生物包含添加间隔基团。在一些实施方案中，经修饰的衍生物包含向n端半胱氨酸(ci)和/或c端半胱氨酸(c
iii
)添加间隔基团。
[0584]
在一些实施方案中，经修饰的衍生物包含一个或多个氧化敏感性氨基酸残基经一个或多个抗氧化氨基酸残基置换。在一些实施方案中，经修饰的衍生物包含色氨酸残基经萘基丙氨酸或丙氨酸残基置换。该实施方案提供改良所得双环肽配体的医药稳定性概况的优点。
[0585]
在一些实施方案中，经修饰的衍生物包含一个或多个带电氨基酸残基经一个或多个疏水性氨基酸残基置换。在一个备选的实施方案中，经修饰的衍生物包含一个或多个疏水性氨基酸残基经一个或多个带电氨基酸残基置换。带电氨基酸残基与疏水性氨基酸残基的正确平衡为双环肽配体的重要特征。例如，疏水性氨基酸残基影响血浆蛋白结合的程度且因此影响血浆中游离可用部分的浓度，而带电氨基酸残基(具体地是精氨酸)可影响肽与细胞表面上的磷脂膜的相互作用。两者以组合形式可影响肽药物的半衰期、分布体积和暴露量，且可根据临床终点进行调整。另外，带电氨基酸残基与疏水性氨基酸残基的正确组合和数目可减小注射部位处(在肽药物已经皮下施用的情况下)的刺激。
[0586]
在一些实施方案中，经修饰的衍生物包含一个或多个l-氨基酸残基经一个或多个d-氨基酸残基置换。据信该实施方案通过空间位阻和通过d-氨基酸稳定β转角构象的倾向来增加蛋白水解稳定性(tugyi等人(2005)pnas,102(2),413-418)。
[0587]
在d-氨基酸稳定β转角构象时，经修饰的衍生物包含移除任何氨基酸残基且经丙氨酸取代。该实施方案提供移除潜在蛋白水解攻击位点的优点。
[0588]
应注意，上述修饰中的每一个用以有意地改良肽的效力或稳定性。基于修饰的其他效力改良可经由以下机制实现：
[0589]-掺入疏水性部分，所述疏水性部分利用疏水性作用且产生较低解离速率，使得获得较高的亲和力；
[0590]-掺入带电基团，所述带电基团利用长距离离子相互作用，从而产生较快缔合速率和较高亲和力(参见例如schreiber等人，rapid,electrostatically assisted association of proteins(1996),nature struct.biol.3,427-31)；以及
[0591]-经由例如以下操作向肽中掺入额外限制：正确地限制氨基酸的侧链以使得熵损失在靶标结合时最小，限制主链的扭转角以使得熵损失在靶标结合时最小，和出于相同原因而在分子中引入额外环化。(关于综述，参见gentilucci等人,curr.pharmaceutical design,(2010),16,3185-203,和nestor等人,curr.medicinal chem(2009),16,4399-418)。
[0592]
本发明的经修饰杂串联双环肽复合物的实例包括下表h和i中所列出的那些复合物：
[0593]
表h：(epha2：cd137；1:2)
[0594][0595]
表i：(柄蛋白-4：cd137；1:2)
[0596][0597]
同位素变异
[0598]
本发明包括所有医药学上可接受的经(放射性)同位素标记的本发明的肽配体，其中一个或多个原子经具有相同原子数但原子质量或质量数不同于自然界中通常所发现的原子质量或质量数的原子置换；和本发明的肽配体，其中连接有金属螯合基团(称为“效应子”)，所述金属螯合基团能够容纳相关(放射性)同位素；和本发明的肽配体，其中某些官能团经相关(放射性)同位素或经同位素标记的官能团共价置换。
[0599]
适用于包括在本发明的肽配体中的同位素的实例包括：氢的同位素，诸如2h(d)和3h(t)；碳的同位素，诸如
11
c、
13
c和
14
c；氯的同位素，诸如
36
cl；氟的同位素，诸如
18
f；碘的同位
烯-1-酮(tata)(angewandte chemie,international edition(2014),53(6),1602-1606)。含有α-卤代甲基羰基的化合物的实例为n,n',n
”‑
(苯-1,3,5-三基)三(2-溴乙酰胺)。硒代半胱氨酸也是与半胱氨酸具有类似反应性且可用于相同反应的天然氨基酸。因此，除非上下文另外提出，否则每当提及半胱氨酸时，取代物硒代半胱氨酸为通常可接受的。
[0614]
合成
[0615]
本发明的肽可经由标准技术合成制备，随后在体外与分子骨架反应。当进行此操作时，可使用标准化学方法。这使得能够快速大规模制备可溶性材料以用于其他下游实验或验证。此类方法可使用诸如timmerman等人(见上文)中所公开的常规化学方法来实现。
[0616]
因此，本发明还涉及制备如本文中所述的所选多肽或缀合物，其中该制备包括如下文所解释的任选地选用的其他步骤。在一个实施方案中，对经由化学合成制得的最终产物多肽/缀合物进行这些步骤。
[0617]
任选地，所关注多肽中的氨基酸残基可在制备缀合物或复合物时被取代。
[0618]
肽也可经延伸，以掺入例如另一个环并且因此引入多特异性。
[0619]
为了延伸肽，其仅可在其n端或c端处或在环内使用正交保护的赖氨酸(及类似物)使用标准固相或溶液相化学方法以化学方式延伸。标准(生物)缀合技术可用于引入活化的或可活化的n端或c端。备选地，添加可经由片段缩合或天然化学连接来进行，例如，如(dawson等人1994.synthesis of proteins by native chemical ligation.science 266:776-779)中所描述；或经由酶，例如使用枯草杆菌酶(subtiligase)来进行，如(chang等人，proc natl acad sci u s a.1994dec 20；91(26):12544-8，或hikari等人，bioorganic&medicinal chemistry letters volume 18,issue 22,15november 2008,pages 6000-6003)中所描述。
[0620]
备选地，肽可通过经由二硫键进一步缀合来延伸或修饰。这具有允许第一肽和第二肽在处于细胞的还原环境内时彼此解离的额外优点。在此情况下，分子骨架(例如，tata)可在第一肽的化学合成期间添加，以便与三个半胱氨酸基团反应；另一半胱氨酸或硫醇接着可连接至第一肽的n端或c端，使得该半胱氨酸或硫醇仅与第二肽的游离半胱氨酸或硫醇反应，从而形成二硫键连接的双环肽-肽结合物。
[0621]
类似技术同样适用于合成/偶联两个双环和双特异性大环化合物，从而有可能形成四特异性分子。
[0622]
此外，其他官能团或效应基团的添加可以相同方式使用适当化学方法在n端或c端处或经由侧链偶联来实现。在一个实施方案中，偶联以使得其不阻断任一实体的活性的方式进行。
[0623]
2.化合物和定义：
[0624]
如本文中所使用，术语“医药学上可接受的盐”是指在合理医学判断的范畴内适用于与人类和低等动物的组织接触而无不需要的毒性、刺激和过敏反应等且与合理益处/风险比相称的那些盐。医药学上可接受的盐在本领域中是公知的。例如，s.m.berge等人在j.pharmaceutical sciences,1977,66,1
–
19中详细描述了医药学上可接受的盐，该文献以引用的方式并入本文中。本发明化合物的医药学上可接受的盐包括来源于适合的无机酸和碱和有机酸和碱的那些盐。医药学上可接受的无毒酸加成盐的实例为氨基与无机酸(诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和过氯酸)或与有机酸(诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、
琥珀酸或丙二酸)形成的盐，或经由使用本领域中所使用的其他方法(诸如离子交换)形成的盐。其他医药学上可接受的盐包括己二酸盐、褐藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐及其类似物。
[0625]
来源于适当碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和n

(c
1-4
烷基)4盐。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐和类似盐。在适当时，其他医药学上可接受的盐包括无毒铵盐、季铵盐以及胺阳离子，其使用诸如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根的相对离子形成。
[0626]
除非另外陈述，否则本文中所描绘的结构也意欲包括该结构的所有异构(例如，对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构))形式；例如，各不对称中心的r和s构型、z和e双键异构体以及z和e构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)混合物在本发明的范畴内。除非另外陈述，否则本发明的化合物的所有互变异构形式均在本发明的范畴内。另外，除非另外陈述，否则本文中所描绘的结构也意欲包括仅在存在一个或多个同位素富集原子的方面不同的化合物。例如，具有包括氢由氘或氚置换或碳由
13
c-或
14
c-富集的碳置换的本发明结构的化合物在本发明的范畴内。此类化合物适用作例如分析工具、生物测定中的探针或根据本发明的治疗剂。
[0627]
如本文中所使用，术语“约”是指在给定值的20％内。在一些实施方案中，术语“约”指在给定值的20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％内。
[0628]
如本文中所使用，术语“mg/kg”是指服用药物的受试者每公斤体重的药物的毫克数。
[0629]
3.医药学上可接受的组合物
[0630]
根据一些实施方案，本发明提供一种医药组合物，其包含：杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐，该杂串联双环肽复合物包含一个或多个cd137结合性肽配体；和医药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物。在一些实施方案中，本发明提供一种用于治疗癌症的医药组合物，该医药组合物包含：杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐，该杂串联双环肽复合物包含一个或多个cd137结合性肽配体；免疫肿瘤学药剂；和医药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物。
[0631]
在一些实施方案中，本发明提供一种医药组合物，其包含bt7480或其医药学上可接受的盐和医药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物。在一些实施方案中，本发明提供一种用于治疗癌症的医药组合物，其包含bt7480或其医药学上可接受的盐、免疫肿瘤学药剂和医药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物。
[0632]
在一些实施方案中，本发明提供一种医药组合物，其包含bt7455或其医药学上可
接受的盐和医药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物。在一些实施方案中，本发明提供一种用于治疗癌症的医药组合物，其包含bt7455或其医药学上可接受的盐、免疫肿瘤学药剂和医药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物。
[0633]
在一些实施方案中，组合物包含医药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物。术语“医药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物”指不破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒介物。可用于本发明的组合物中的医药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物包括但不限于：离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白，诸如人类血清白蛋白；缓冲物质，诸如磷酸盐；甘氨酸；山梨酸；山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物；水；盐或电解质，诸如硫酸鱼精蛋白；磷酸氢二钠；磷酸氢钾；氯化钠；锌盐；胶态二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯基吡咯啶酮；基于纤维素的物质；聚乙二醇；羧甲基纤维素钠；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物；聚乙二醇；和羊毛脂。
[0634]
如本文中所使用，术语“患者”意指动物，优选为哺乳动物，并且最优选为人类。
[0635]
本发明的组合物可经口、肠胃外、经由吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入式贮器施用。如本文中所使用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。在一些实施方案中，组合物经口、腹膜内或静脉内施用。本发明的组合物的无菌可注射形式可为水性或油性悬浮液。这些悬浮液可根据本领域中已知的技术使用适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂也可为在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液形式。可采用的可接受的媒介物和溶剂为水、林格氏溶液(ringer's solution)和等渗氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油常规地用作溶剂或悬浮介质。
[0636]
为此目的，可采用任何温和不挥发性油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸(诸如油酸及其甘油酯衍生物)适用于制备可注射剂，天然医药学上可接受的油(诸如橄榄油或蓖麻油，尤其呈其聚氧乙烯化形式)亦如此。这些油溶液或悬浮液也可含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如羧甲基纤维素或常用于配制医药学上可接受的剂型(包括乳液和悬浮液)的类似分散剂。其他常用界面活性剂(诸如tween、span和其他乳化剂)或常用于制备医药学上可接受的固体、液体或其他剂型的生物利用度增强剂也可用于配制的目的。
[0637]
本发明的医药学上可接受的组合物可以任何经口可接受的剂型经口施用，包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于经口使用的片剂的情况下，常用载剂包括乳糖和玉米淀粉。通常也添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口施用，适用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。当需要水性悬浮液用于经口使用时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要，也可添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
[0638]
备选地，本发明的医药学上可接受的组合物可以用于经直肠施用的栓剂的形式施用。这些栓剂可通过将药剂与适合的非刺激性赋形剂混合来制备，该赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体并且因此将在直肠中融化以释放药物。此类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
[0639]
本发明的医药学上可接受的组合物也可局部施用，尤其当治疗目标包括经由局部施用容易达到的区域或器官时，包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病。容易制备适合的局部制剂以用于这些区域或器官中的每一个。
[0640]
用于下肠道的局部施用可以直肠栓剂制剂(参见上文)或以适合的灌肠剂制剂形式实现。也可使用局部经皮贴片。
[0641]
对于局部施用，所提供的医药学上可接受的组合物可以含有悬浮或溶解在一种或多种载剂中的活性组分的适合软膏形式进行配制。用于本发明化合物的局部施用的载剂包括但不限于矿物油、液体石蜡脂、白石蜡脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。备选地，所提供的医药学上可接受的组合物可以含有悬浮或溶解在一种或多种医药学上可接受的载剂中的活性组分的适合洗液或乳膏形式进行配制。适合的载剂包括但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。
[0642]
对于经眼使用，所提供的医药学上可接受的组合物可配制为具有或不具有防腐剂(诸如苯扎氯铵)、在等渗ph值经调整的无菌生理盐水中的微米化悬浮液，或优选为在等渗ph值经调整的无菌生理盐水中的溶液。备选地，对于经眼使用，医药学上可接受的组合物可以软膏(诸如石蜡脂)形式进行配制。
[0643]
本发明的医药学上可接受的组合物也可经由经鼻气雾剂或吸入来施用。此类组合物根据医药配制领域中熟知的技术来制备，且可采用苯甲醇或其他适合的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规溶解剂或分散剂制备成在生理盐水中的溶液。
[0644]
本发明的医药学上可接受的组合物也可经配制用于经口施用。此类制剂可与食物一起或不与食物一起施用。在一些实施方案中，本发明的医药学上可接受的组合物不与食物一起施用。在其他实施方案中，本发明的医药学上可接受的组合物与食物一起施用。
[0645]
还应理解，用于任何特定患者的特定剂量和治疗方案将依赖于多种因素，所述因素包括所采用的特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、膳食、施用时间、排泄率、药物组合和治疗医师的判断以及所治疗的特定疾病的严重程度。本发明化合物在组合物中的量也取决于组合物中的特定化合物。
[0646]
4.用于治疗癌症的方法
[0647]
根据一些实施方案，本发明提供一种治疗患者的癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐和免疫肿瘤学药剂。
[0648]
在一些实施方案中，本发明提供一种包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物或其医药学上可接受的盐与免疫肿瘤学药剂组合用于治疗癌症的用途。
[0649]
在一些实施方案中，本发明提供一种治疗患者的癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的bt7480或其医药学上可接受的盐和免疫肿瘤学药剂。在一些实施方案中，本发明提供bt7480或其医药学上可接受的盐与免疫肿瘤学药剂组合用于治疗癌症的用途。
[0650]
在一些实施方案中，本发明提供一种治疗患者的癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的bt7455或其医药学上可接受的盐和免疫肿瘤学药剂。在一些实施方案中，本发明提供bt7455或其医药学上可接受的盐与免疫肿瘤学药剂组合用于治疗癌症的用途。
[0651]
示例性的癌症
[0652]
在一些实施方案中，癌症为实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症与mt1-mmp相关。在一些实施方案中，癌症为高mt1-mmp表达的癌症。例如，adley等人已报道mt1-mmp在卵巢的
透明细胞癌中具有高表达水平(adley等人.“expression of membrane type 1matrix metalloproteinase(mmp-14)in epithelial ovarian cancer:high level expression in clear cell carcinoma”gynecol oncol.2009 february；112(2):319-324)。
[0653]
在一些实施方案中，癌症与柄蛋白-4相关。在一些实施方案中，癌症为高柄蛋白-4表达的癌症。
[0654]
在一些实施方案中，癌症与epha2相关。在一些实施方案中，癌症为高epha2表达的癌症。
[0655]
在一些实施方案中，癌症与pd-l1相关。在一些实施方案中，癌症为高pd-l1表达的癌症。
[0656]
在一些实施方案中，癌症与psma相关。在一些实施方案中，癌症为高psma表达的癌症。
[0657]
在一些实施方案中，癌症为膀胱癌。在一些实施方案中，膀胱癌选自由以下组成的组：基底、p53样和内腔的癌症。
[0658]
在一些实施方案中，癌症为子宫内膜癌。在一些实施方案中，子宫内膜癌选自由以下组成的组：mmr-d、pole edm、p53 wt、p53异常、i型、ii型、癌、癌肉瘤、子宫内膜样腺癌、浆液性癌、透明细胞癌、黏液性癌、混合或未分化性癌、混合浆液性和子宫内膜样癌、混合浆液性和低级子宫内膜样癌和未分化癌。
[0659]
在一些实施方案中，癌症为食道癌。在一些实施方案中，食道癌选自由以下组成的组：腺癌(eac)、鳞状细胞癌(escc)、染色体不稳定性(cin)、埃-巴病毒(ebv)、基因组稳定(gs)和微卫星不稳定性(msi)。
[0660]
在一些实施方案中，癌症为神经胶母细胞瘤。在一些实施方案中，神经胶母细胞瘤选自由以下组成的组：前神经、神经、典型和间叶细胞。
[0661]
在一些实施方案中，癌症为间皮瘤。在一些实施方案中，间皮瘤选自由以下组成的组：胸膜间皮瘤、腹膜间皮瘤、心包间皮瘤、上皮样间皮瘤、肉瘤样间皮瘤、双相间皮瘤和恶性间皮瘤。
[0662]
在一些实施方案中，癌症为多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，多发性骨髓瘤选自由以下组成的组：超二倍体、非超二倍体、周期蛋白d易位、mmset易位、maf易位和类别不明的。
[0663]
在一些实施方案中，癌症为卵巢癌。在一些实施方案中，卵巢癌选自由以下组成的组：透明细胞、子宫内膜样、黏液性、高级浆液性和低级浆液性卵巢癌。
[0664]
在一些实施方案中，癌症为胰脏癌。在一些实施方案中，胰脏癌选自由以下组成的组：鳞状、胰脏祖细胞、免疫原性和adex(异常分化内分泌外分泌)胰脏癌。
[0665]
在一些实施方案中，癌症为前列腺癌。在一些实施方案中，前列腺癌选自由以下组成的组：azgp1(亚型i)、muc1(亚型ii)和muc1(亚型iii)前列腺癌。
[0666]
在一些实施方案中，癌症为肺癌。在一些实施方案中，肺癌为met-扩增的鳞状nsclc、具有野生型egfr的鳞状细胞nsclc或表达t790m egfr的肺腺癌。
[0667]
在一些实施方案中，癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌为基底样三阴性乳腺癌。
[0668]
在一些实施方案中，癌症为结肠癌。在一些实施方案中，癌症为结肠直肠腺癌。在
一些实施方案中，结肠直肠腺癌为高表达pgp的结肠直肠腺癌。
[0669]
在一些实施方案中，癌症为胃癌。在一些实施方案中，胃癌为fgfr扩增的胃癌。
[0670]
在一些实施方案中，癌症为头颈癌。在一些实施方案中，头颈癌为鼻中隔鳞状细胞癌。
[0671]
在一些实施方案中，癌症为肉瘤。在一些实施方案中，肉瘤为纤维肉瘤。在一些实施方案中，纤维肉瘤为n-ras突变/idh1突变软组织肉瘤(sts)。
[0672]
在一个实施方案中，癌症包括但不限于：白血病(例如，急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓细胞性白血病、急性骨髓母细胞性白血病、急性前髓细胞性白血病、急性骨髓单核细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性骨髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤(例如，霍奇金氏病或非霍奇金氏病)、waldenstrom巨球蛋白血症(waldenstrom's macroglobulinemia)、多发性骨髓瘤、重链病，和实体肿瘤，诸如肉瘤和癌(例如，纤维肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰脏癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓质癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、威尔姆氏肿瘤(wilm's tumor)、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(gbm，亦称为神经胶母细胞瘤)、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、寡树突神经胶质瘤、神经鞘瘤、神经纤维肉瘤、脑膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤)。
[0673]
在一些实施方案中，癌症为神经胶质瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(gbm，亦称为神经胶母细胞瘤)、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、寡树突神经胶质瘤、神经鞘瘤、神经纤维肉瘤、脑膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤或视网膜母细胞瘤。
[0674]
在一些实施方案中，癌症为听神经瘤、星形细胞瘤(例如，i级-毛细胞型星形细胞瘤、ii级-低级星形细胞瘤、iii级-间变性星形细胞瘤或iv级-神经胶母细胞瘤(gbm))、脊索瘤、cns淋巴瘤、颅咽管瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、混合性神经胶质瘤、视神经神经胶质瘤、室管膜下室管膜瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、转移性脑肿瘤、寡树突神经胶质瘤、垂体肿瘤、原始神经外胚层(pnet)肿瘤或神经鞘瘤。在一些实施方案中，癌症为在儿童中比成年人中更常见的类型，诸如脑干神经胶质瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、幼年型毛细胞性星形细胞瘤(jpa)、髓母细胞瘤、视神经神经胶质瘤、松果体肿瘤、原始神经外胚层肿瘤(pnet)或横纹肌样瘤。在一些实施方案中，患者为成年人。在一些实施方案中，患者为儿童或儿科患者。
[0675]
在另一实施方案中，癌症非包括但不限于：间皮瘤、肝胆(肝和胆管)癌、骨癌、胰脏癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、胃肠道(胃、结肠直肠和十二指肠)癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金氏病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、睾丸癌、慢性或急性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、非霍奇金氏淋巴瘤、脊柱轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、肾上腺皮质癌、胆囊癌、多发性骨髓瘤、胆管癌、纤维肉瘤、神经母细胞
瘤、视网膜母细胞瘤或前述癌症中的一种或多种的组合。
[0676]
在一些实施方案中，癌症选自：肝细胞癌、卵巢癌、卵巢上皮癌或输卵管癌；乳头状浆液性囊腺癌或子宫乳头状浆液性癌(upsc)；前列腺癌；睾丸癌；胆囊癌；肝胆管癌；软组织和骨滑膜肉瘤；横纹肌肉瘤；骨肉瘤；软骨肉瘤；尤因肉瘤；间变性甲状腺癌；肾上腺皮质腺瘤；胰脏癌；胰管癌或胰脏腺癌；胃肠道/胃(gist)癌；淋巴瘤；头颈部鳞状细胞癌(scchn)；唾液腺癌；神经胶质瘤或脑癌；神经纤维瘤-1相关的恶性周围神经鞘肿瘤(mpnst)；waldenstrom巨球蛋白血症；或髓母细胞瘤。
[0677]
在一些实施方案中，癌症选自：肝细胞癌(hcc)、肝母细胞瘤、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、输卵管癌、乳头状浆液性囊腺癌、子宫乳头状浆液性癌(upsc)、肝胆管癌、软组织和骨滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、间变性甲状腺癌、肾上腺皮质腺瘤、胰脏癌、胰管癌、胰脏腺癌、神经胶质瘤、神经纤维瘤-1相关的恶性周围神经鞘肿瘤(mpnst)、waldenstrom巨球蛋白血症或髓母细胞瘤。
[0678]
在一些实施方案中，癌症为实体肿瘤，诸如肉瘤、癌或淋巴瘤。实体肿瘤一般包含通常不包括囊肿或液体区域的异常组织块。在一些实施方案中，癌症选自：肾细胞癌或肾癌；肝细胞癌(hcc)或肝母细胞瘤或肝癌；黑素瘤；乳腺癌；结肠直肠癌或结直肠癌；结肠癌；直肠癌；肛门癌；肺癌，诸如非小细胞肺癌(nsclc)或小细胞肺癌(sclc)；卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢癌或输卵管癌；乳头状浆液性囊腺癌或子宫乳头状浆液性癌(upsc)；前列腺癌；睾丸癌；胆囊癌；肝胆管癌；软组织和骨滑膜肉瘤；横纹肌肉瘤；骨肉瘤；软骨肉瘤；尤因肉瘤；间变性甲状腺癌；肾上腺皮质癌；胰脏癌；胰管癌或胰脏腺癌；胃肠道/胃(gist)癌；淋巴瘤；头颈部鳞状细胞癌(scchn)；唾液腺癌；神经胶质瘤或脑癌；神经纤维瘤-1相关的恶性周围神经鞘肿瘤(mpnst)；waldenstrom巨球蛋白血症；或髓母细胞瘤。
[0679]
在一些实施方案中，癌症选自：肾细胞癌、肝细胞癌(hcc)、肝母细胞瘤、结肠直肠癌、结直肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢癌、输卵管癌、乳头状浆液性囊腺癌、子宫乳头状浆液性癌(upsc)、肝胆管癌、软组织和骨滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、间变性甲状腺癌、肾上腺皮质癌、胰脏癌、胰管癌、胰脏腺癌、神经胶质瘤、脑癌、神经纤维瘤-1相关的恶性周围神经鞘肿瘤(mpnst)、waldenstrom巨球蛋白血症或髓母细胞瘤。
[0680]
在一些实施方案中，癌症选自肝细胞癌(hcc)、肝母细胞瘤、结肠癌、直肠癌、卵巢癌(ovarian cancer)、卵巢上皮癌、卵巢部癌(ovarian carcinoma)、输卵管癌、乳头状浆液性囊腺癌、子宫乳头状浆液性癌(upsc)、肝胆管癌、软组织和骨滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、间变性甲状腺癌、肾上腺皮质癌、胰脏癌、胰管癌、胰脏腺癌、神经胶质瘤、神经纤维瘤-1相关的恶性周围神经鞘肿瘤(mpnst)、waldenstrom巨球蛋白血症或髓母细胞瘤。
[0681]
在一些实施方案中，癌症为肝细胞癌(hcc)。在一些实施方案中，癌症为肝母细胞瘤。在一些实施方案中，癌症为结肠癌。在一些实施方案中，癌症为直肠癌。在一些实施方案中，癌症为卵巢癌或卵巢部癌。在一些实施方案中，癌症为卵巢上皮癌。在一些实施方案中，癌症为输卵管癌。在一些实施方案中，癌症为乳头状浆液性囊腺癌。在一些实施方案中，癌症为子宫乳头状浆液性癌(upsc)。在一些实施方案中，癌症为肝胆管癌。在一些实施方案中，癌症为软组织和骨滑膜肉瘤。在一些实施方案中，癌症为横纹肌肉瘤。在一些实施方案中，癌症为骨肉瘤。在一些实施方案中，癌症为间变性甲状腺癌。在一些实施方案中，癌症为
肾上腺皮质癌。在一些实施方案中，癌症为胰脏癌或胰管癌。在一些实施方案中，癌症为胰脏腺癌。在一些实施方案中，癌症为神经胶质瘤。在一些实施方案中，癌症为恶性周围神经鞘肿瘤(mpnst)。在一些实施方案中，癌症为神经纤维瘤-1相关的mpnst。在一些实施方案中，癌症为waldenstrom巨球蛋白血症。在一些实施方案中，癌症为髓母细胞瘤。
[0682]
在一些实施方案中，癌症为病毒相关的癌症，包括人类免疫缺陷病毒(hiv)相关的实体肿瘤、人类乳头状瘤病毒(hpv)-16阳性不可治愈实体肿瘤和成年人t细胞白血病，其由i型人类t细胞白血病病毒(htlv-i)引起并且是以白血病细胞中htlv-i的克隆整合为特征的cd4 t细胞白血病的高度侵袭形式(参见https://clinicaltrials.gov/ct2/show/study/nct02631746)；以及胃癌、鼻咽癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、头颈部鳞状细胞癌和梅克尔氏细胞癌中的病毒相关的肿瘤。(参见https://clinicaltrials.gov/ct2/show/study/nct02488759；还参见https://clinicaltrials.gov/ct2/show/study/nct0240886；
[0683]
https://clinicaltrials.gov/ct2/show/nct02426892)。
[0684]
在一些实施方案中，癌症为黑素瘤癌。在一些实施方案中，癌症为乳腺癌。在一些实施方案中，癌症为肺癌。在一些实施方案中，肺癌为小细胞肺癌(sclc)。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌(nsclc)。
[0685]
在一些实施方案中，通过遏制肿瘤的进一步生长来治疗癌症。在一些实施方案中，通过使肿瘤的大小(例如，体积或质量)相对于在治疗之前的肿瘤大小减小至少5％、10％、25％、50％、75％、90％或99％来治疗癌症。在一些实施方案中，通过使患者中的肿瘤数量相对于在治疗之前的肿瘤数量减小至少5％、10％、25％、50％、75％、90％或99％来治疗癌症。
[0686]
根据本发明的方法的杂串联双环肽复合物和组合物可使用对治疗或减轻癌症的严重程度有效的任何量和任何施用途径来施用。取决于受试者的物种、年龄和一般状况、疾病或病状的严重程度、特定药剂、其施用模式及其类似因素，所需精确量将随各受试者而变化。为易于施用和剂量均一性，杂串联双环肽复合物优选地以剂量单位形式进行配制。如本文中所使用的表述“剂量单位形式”是指适合于待治疗患者的药剂的物理离散单位。然而，将理解，本发明的杂串联双环肽复合物和组合物的每日总用量将由主治医师在合理医学判断的范畴内决定。用于任何特定患者或生物体的特定有效剂量水平取决于多种因素，所述因素包括待治疗的病症和病症的严重程度；所采用特定化合物的活性；所采用的特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和膳食；施用时间、施用途径和所采用特定化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所采用特定化合物组合或同时使用的药物；和医学领域中熟知的类似因素。如本文中所使用，术语“患者”意指动物，优选为哺乳动物，且最优选为人类。
[0687]
本发明的医药学上可接受的组合物可取决于所治疗的疾病或病症的严重程度而经口、经直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如经由粉剂、软膏或滴剂)、经颊(如经口或鼻喷雾)或其类似方式施用至人类和其他动物。在某些实施方案中，本发明的杂串联双环肽复合物可以约0.01mg/kg至约100mg/kg或约1mg/kg至约25mg/kg受试者体重/天的剂量水平一天一次或多次经口或肠胃外施用，以获得所需治疗作用。
[0688]
用于经口施用的液体剂型包括但不限于医药学上可接受的乳液、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物以外，液体剂型可含有本领域中常用的惰性稀释剂，诸如水或其他溶剂；增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯
甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(具体地，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯；和其混合物。除惰性稀释剂的外，经口组合物也可包括佐剂，诸如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
[0689]
可根据已知技术使用适合的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可为在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如呈在1,3-丁二醇中的溶液形式。可采用的可接受的媒介物和溶剂为水、林格氏溶液、u.s.p.和等渗氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油常规地用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用任何温和不挥发性油，包括合成单甘油酯或二甘油酯。另外，诸如油酸的脂肪酸可用于制备可注射剂。
[0690]
可例如通过经由细菌截留过滤器过滤或经由掺入在使用之前可溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中的呈无菌固体组合物形式的灭菌剂而对可注射制剂灭菌。
[0691]
为延长本发明的化合物的作用，通常需要减缓来自皮下或肌内注射的化合物的吸收。此可通过使用具有不良水溶性的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，溶解速率又可取决于晶体大小和结晶形式。备选地，通过将化合物溶解或悬浮在油媒介物中来实现肠胃外施用的化合物的延迟吸收。通过在诸如聚丙交酯-聚乙交酯的生物可降解聚合物中形成化合物的微胶囊基质来制造可注射储库形式。取决于化合物与聚合物的比率和所采用的特定聚合物的性质，可控制化合物释放的速率。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。也可通过将化合物包裹在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备储库式可注射制剂
[0692]
用于经直肠或经阴道施用的组合物优选为可通过将本发明的杂串联双环肽复合物与适合的非刺激性赋形剂或载剂(诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合而制备的栓剂，所述非刺激性赋形剂或载剂在环境温度下为固体但在体温下为液体并且因此在直肠或阴道腔中融化并释放活性化合物。
[0693]
用于经口施用的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和粒剂。在此类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性、医药学上可接受的赋形剂或载剂(诸如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下混合：a)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)黏合剂，诸如羧甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，诸如甘油；d)崩解剂，诸如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，诸如石蜡；f)吸收促进剂，诸如季铵化合物；g)润湿剂，诸如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸收剂，诸如高岭土和膨润土；和i)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型也可包含缓冲剂。
[0694]
类似类型的固体组合物也可用作使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇及其类似物的赋形剂的软填充和硬填充明胶胶囊中的填充剂。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂和粒剂的固体剂型可经制备具有包衣和外壳，诸如肠溶包衣和医药配制领域中熟知的其他包衣。其可任选地含有乳浊剂并且也可具有仅在或优先在肠道的某一部分中任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。类似类型的固体组合物也可用作使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇及其类似物的赋形剂的软
填充和硬填充明胶胶囊中的填充剂。
[0695]
活性化合物也可与如上文所指出的一种或多种赋形剂一起呈微囊封形式。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂和粒剂的固体剂型可经制备具有包衣和外壳，诸如肠溶包衣、控制释放的包衣和医药配制领域中熟知的其他包衣。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性稀释剂(诸如蔗糖、乳糖或淀粉)掺合。如通常实践，此类剂型也可包含除惰性稀释剂的外的额外物质，例如制片剂润滑剂及其他制片剂助剂，诸如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型也可包含缓冲剂。其可任选地含有乳浊剂并且也可具有仅在或优先在肠道的某一部分中任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。
[0696]
用于局部或经皮施用(例如)如本文中所述的包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物的剂型包括软膏、糊剂、乳膏、洗液、凝胶、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。活性组分在无菌条件下与医药学上可接受的载剂和如可为所需的任何所需防腐剂或缓冲剂混合。眼科制剂、滴耳剂和滴眼剂也包括在本发明的范畴内。另外，本发明涵盖使用经皮贴片，其具有向身体提供化合物的受控递送的附加优点。可通过将化合物溶解或分配在适当介质中来制得此类剂型。也可使用吸收增强剂来增加化合物的透皮量。可通过提供速率控制膜或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。
[0697]
杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂的共施用
[0698]
(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂可作为多次剂量方案的部分分开施用。备选地，(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂可在单一组合物中混合在一起作为单一剂型。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物为bt7480或bt7455或其医药学上可接受的盐。
[0699]
在一些实施方案中，(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物与免疫肿瘤学药剂分开施用。在一些实施方案中，(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂同时施用。在一些实施方案中，(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂依序施用。在一些实施方案中，(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂在彼此间隔一段时间内施用，例如在彼此间隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时内施用。在一些实施方案中，(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂在大于24小时间隔内施用。在一些实施方案中，(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂在彼此间隔1、2、3、4、5、6或7天内施用。在一些实施方案中，(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂在大于一周间隔内施用。在一些实施方案中，(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂在彼此间隔1、2、3、4或5周内施用。
[0700]
如本文中所使用，术语“组合”、“组合的”和相关术语指同时或依序施用根据本发明的治疗剂。例如，(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物可与免疫肿瘤学药剂以单独单位剂型同时或依序施用，或以单一单位剂型一起施用。因此，在一些实施方案中，本发明提供一种单一单位剂型，其包含(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物、免疫肿瘤学药剂和任选的医药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物。
[0701]
可与载剂材料组合以产生单一剂型的(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂的量将视所治疗的宿主和特定施用模式而变化。优选地，应配制本发
明的组合物以使得可施用在0.001-100mg/kg体重/天之间的剂量的(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物。
[0702]
(例如)如本文中所述的包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂可协同地作用。因此，此类组合物中的(例如)如本文中所述的杂串联双环肽复合物和免疫肿瘤学药剂的量可小于在仅使用所述治疗剂的单药疗法中所需的量。
[0703]
本发明的组合物中所存在的免疫肿瘤学药剂的量可不超过通常将在包含其作为唯一活性剂的组合物中所施用的量。优选地，本发明所公开的组合物中的免疫肿瘤学药剂的量将在通常存在于包含该药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中的量的约50％至100％范围内。在一些实施方案中，以作为单药疗法通常施用的量的约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％的剂量施用免疫肿瘤学药剂。如本文中所使用，词组“通常施用”意指fda批准的治疗剂经批准用于根据fda标签插页给药的量。
[0704]
本发明的医药组合物也可以掺入用于包覆可植入医学装置的组合物中，该可植入医学装置诸如假体、人工瓣膜、血管移植物、支架和导管。血管支架例如已用于克服再狭窄(损伤后的血管壁再狭窄)。然而，使用支架或其他可植入装置的患者具有凝块形成或血小板活化的风险。可通过用包含激酶抑制剂的医药学上可接受的组合物预包覆装置来预防或缓解这些不需要的作用。用本发明化合物包覆的可植入装置为本发明的另一实施方案。
[0705]
5.示例性免疫肿瘤学药剂
[0706]
如本文中所使用，术语“免疫肿瘤学药剂”指有效增强、刺激和/或上调受试者的免疫反应的药剂。在一些实施方案中，施用免疫肿瘤学药剂与(例如)如本文中所述的包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物在治疗癌症中具有协同作用。
[0707]
免疫肿瘤学药剂可为例如小分子药物、抗体或生物分子或小分子。生物免疫肿瘤学药剂的实例包括但不限于癌症疫苗、抗体和细胞因子。在一些实施方案中，抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，单克隆抗体为人源化或人类抗体。
[0708]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为(i)刺激(包括共刺激)受体的激动剂或(ii)在t细胞上抑制(包括共抑制)信号的拮抗剂，其两者皆引起扩大抗原特异性t细胞反应。
[0709]
某些刺激和抑制分子为免疫球蛋白超家族(igsf)成员。结合于共刺激或共抑制受体的膜结合配体的一个重要家族为b7家族，其包括b7-1、b7-2、b7-h1(pd-l1)、b7-dc(pd-l2)、b7-h2(icos-l)、b7-h3、b7-h4、b7-h5(vista)和b7-h6。结合于共刺激或共抑制受体的膜结合配体的另一家族为结合于同源tnf受体家族成员的分子的tnf家族，其包括cd40和cd40l、ox-40、ox-40l、cd70、cd27l、cd30、cd30l、4-1bbl、cd137(4-1bb)、trail/apo2-l、trailr1/dr4、trailr2/dr5、trailr3、trailr4、opg、rank、rankl、tweakr/fn14、tweak、baffr、edar、xedar、taci、april、bcma、ltβr、light、dcr3、hvem、vegi/tl1a、tramp/dr3、edar、eda1、xedar、eda2、tnfr1、淋巴毒素α/tnfβ、tnfr2、tnfα、ltβr、淋巴毒素α1β2、fas、fasl、relt、dr6、troy、ngfr。
[0710]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为抑制t细胞活化的细胞因子(例如，il-6、il-10、tgf-β、vegf和其他免疫抑制性细胞因子)或刺激t细胞活化以刺激免疫反应的细胞因子。
[0711]
在一些实施方案中，(例如)如本文中所述的包含一个或多个cd137结合性肽配体的杂串联双环肽复合物与免疫肿瘤学药剂的组合可刺激t细胞反应。在一些实施方案中，杂串联双环肽复合物为bt7480或bt7455或其医药学上可接受的盐。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为：(i)抑制t细胞活化的蛋白的拮抗剂(例如，免疫检查点抑制剂)，所述抑制t细胞活化的蛋白诸如ctla-4、pd-1、pd-l1、pd-l2、lag-3、tim-3、半乳糖凝集素9、ceacam-1、btla、cd69、半乳糖凝集素-1、tigit、cd113、gpr56、vista、2b4、cd48、garp、pd1h、lair1、tim-1和tim-4；或(ii)刺激t细胞活化的蛋白的激动剂，所述刺激t细胞活化的蛋白诸如b7-1、b7-2、cd28、4-1bb(cd137)、4-1bbl、icos、icos-l、ox40、ox40l、gitr、gitrl、cd70、cd27、cd40、dr3和cd28h。
[0712]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为nk细胞上的抑制受体的拮抗剂或nk细胞上的活化受体的激动剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为kir的拮抗剂，诸如利瑞鲁单抗(lirilumab)。
[0713]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为抑制或耗尽巨噬细胞或单核细胞的药剂，包括但不限于csf-1r拮抗剂，诸如csf-1r拮抗剂抗体，包括rg7155(wo11/70024、wo11/107553、wo11/131407、wo13/87699、wo13/119716、wo13/132044)或fpa-008(wo11/140249；wo13169264；wo14/036357)。
[0714]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自：连接阳性共刺激受体的激动剂；经由抑制受体、拮抗剂和一种或多种系统地增加抗肿瘤t细胞的频率的药剂减弱信号传导的阻断剂；克服肿瘤微环境内的独特免疫抑制路径(例如，阻断抑制受体接合(例如，pd-l1/pd-1相互作用)、耗尽或抑制treg(例如，使用抗cd25单克隆抗体(例如，达利珠单抗(daclizumab))或经由离体抗cd25珠粒耗尽)、抑制诸如ido的代谢酶或逆转/阻止t细胞能量或耗竭)的药剂；和在肿瘤部位处触发先天免疫活化和/或炎症的药剂。
[0715]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为ctla-4拮抗剂。在一些实施方案中，ctla-4拮抗剂为拮抗性ctla-4抗体。在一些实施方案中，拮抗性ctla-4抗体为yervoy(伊匹单抗(ipilimumab))或曲美单抗(tremelimumab)。
[0716]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为pd-1拮抗剂。在一些实施方案中，pd-1拮抗剂经由输注施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为特异性结合于程序性死亡-1(pd-1)受体且抑制pd-1活性的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，pd-1拮抗剂为拮抗性pd-1抗体。在一些实施方案中，拮抗性pd-1抗体为opdivo(纳武单抗)、keytruda(帕博利珠单抗)或medi-0680(amp-514；wo2012/145493)。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂可为匹地利珠单抗(pidilizumab，ct-011)。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为由与igg1的fc部分融合的pd-l2的胞外结构域(b7-dc)构成的重组蛋白，称为amp-224。
[0717]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为pd-l1拮抗剂。在一些实施方案中，pd-l1拮抗剂为拮抗性pd-l1抗体。在一些实施方案中，pd-l1抗体为mpdl3280a(rg7446；wo2010/077634)、德瓦鲁单抗(durvalumab，medi4736)、bms-936559(wo2007/005874)和msb0010718c(wo2013/79174)。
[0718]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为lag-3拮抗剂。在一些实施方案中，lag-3拮抗剂为拮抗性lag-3抗体。在一些实施方案中，lag3抗体为bms-986016(wo10/19570、wo14/08218)或imp-731或imp-321(wo08/132601、wo009/44273)。
[0719]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为cd137(4-1bb)激动剂。在一些实施方案中，cd137(4-1bb)激动剂为激动性cd137抗体。在一些实施方案中，cd137抗体为乌瑞芦单抗或pf-05082566(wo12/32433)。
[0720]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为gitr激动剂。在一些实施方案中，gitr激动剂为激动性gitr抗体。在一些实施方案中，gitr抗体为bms-986153、bms-986156、trx-518(wo006/105021、wo009/009116)或mk-4166(wo11/028683)。
[0721]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为吲哚胺(2,3)-双加氧酶(ido)拮抗剂。在一些实施方案中，ido拮抗剂选自艾卡哚司他(epacadostat，incb024360，incyte)；吲哚莫德(indoximod，nlg-8189，newlink genetics corporation)；卡博替尼(capmanitib，inc280，novartis)；gdc-0919(genentech/roche)；pf-06840003(pfizer)；bms:f001287(bristol-myers squibb)；phy906/kd108(phytoceutica)；分解犬尿氨酸的酶(kynase，ikenaoncology，先前称为kyntherapeutics)；和nlg-919(wo09/73620、wo009/1156652、wo11/56652、wo12/142237)。
[0722]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为ox40激动剂。在一些实施方案中，ox40激动剂为激动性ox40抗体。在一些实施方案中，ox40抗体为medi-6383或medi-6469。
[0723]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为ox40l拮抗剂。在一些实施方案中，ox40l拮抗剂为拮抗性ox40抗体。在一些实施方案中，ox40l拮抗剂为rg-7888(wo06/029879)。
[0724]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为cd40激动剂。在一些实施方案中，cd40激动剂为激动性cd40抗体。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为cd40拮抗剂。在一些实施方案中，cd40拮抗剂为拮抗性cd40抗体。在一些实施方案中，cd40抗体为卢卡木单抗(lucatumumab)或达西珠单抗(dacetuzumab)。
[0725]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为cd27激动剂。在一些实施方案中，cd27激动剂为激动性cd27抗体。在一些实施方案中，cd27抗体为伐立鲁单抗(varlilumab)。
[0726]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为mga271(针对b7h3)(wo11/109400)。
[0727]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为阿巴伏单抗(abagovomab)、阿达木单抗(adecatumumab)、阿托珠单抗(afutuzumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、麻安莫单抗(anatumomab mafenatox)、阿泊珠单抗(apolizumab)、阿特珠单抗(atezolimab)、阿维鲁单抗(avelumab)、布尔莫单抗(blinatumomab)、bms-936559、卡妥索单抗(catumaxomab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)、艾卡哚司他、依帕珠单抗(epratuzumab)、吲哚莫德、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)、伊特鲁单抗(intelumumab)、伊匹单抗、伊萨妥昔单抗(isatuximab)、兰利珠单抗(lambrolizumab)、med14736、mpdl3280a、纳武单抗、奥比珠单抗(obinutuzumab)、奥卡拉珠单抗(ocaratuzumab)、奥伐木单抗、奥拉他单抗(olatatumab)、帕博利珠单抗、匹地利珠单抗、利妥昔单抗、替西单抗(ticilimumab)、萨马里珠单抗(samalizumab)或曲美单抗。
[0728]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为免疫刺激剂。例如，阻断pd-1和pd-l1抑制轴的抗体可释放活化的肿瘤反应性t细胞，且已在临床试验中展示诱导耐久的抗肿瘤反应，增加肿瘤组织结构的数目，包括常规尚未认为对免疫疗法敏感的一些肿瘤类型。参见例如okazaki,t.等人(2013)nat.immunol.14,1212
–
1218；zou等人(2016)sci.transl.med.8。抗pd-1抗体纳武单抗(bristol-myers squibb，亦称为ono-4538、mdx1106和
bms-936558)已显示出改善在在先的抗血管生成疗法期间或之后已经历疾病进展的rcc患者中的总存活期的潜能。
[0729]
在一些实施方案中，免疫调节治疗剂特异性地诱导肿瘤细胞的细胞凋亡。可用于本发明中的经批准的免疫调节治疗剂包括泊利度胺(pomalidomide，celgene)；来那度胺(lenalidomide，celgene)；巨大戟醇甲基丁烯酸酯(ingenol mebutate，leo pharma)。
[0730]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为癌症疫苗。在一些实施方案中，癌症疫苗选自sipuleucel-t(dendreon/valeant pharmaceuticals)，其已经批准用于治疗无症状或症状轻微的转移性耐去势(激素难治性)前列腺癌；和talimogene laherparepvec(biovex/amgen，先前称为t-vec)，其为一种经批准用于治疗黑素瘤中不可切除的皮肤、皮下和结节病变的遗传修饰的溶瘤病毒疗法。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自溶瘤病毒疗法，诸如pexastimogene devacirepvec(pexavec/jx-594,sillajen/先前称为jennerex biotherapeutics)，其为一种经工程改造以表达gm-csf的胸苷激酶-(tk-)缺陷型牛痘病毒，其用于肝细胞癌(nct02562755)和黑素瘤(nct00429312)；派拉瑞普(pelareorep，oncolytics biotech)，其为一种在非ras活化的细胞中不可复制的呼吸道肠溶性孤儿病毒(呼肠病毒(reovirus))的变体，其用于众多癌症中，包括结肠直肠癌(nct01622543)、前列腺癌(nct01619813)、头颈部鳞状细胞癌(nct01166542)、胰脏腺癌(nct00998322)和非小细胞肺癌(nsclc)(nct00861627)；恩那希瑞(enadenotucirev，ng-348,psioxus，先前称为coload1)，其为一种经工程改造以表达对t细胞受体cd3蛋白具有特异性的全长cd80和抗体片段的腺病毒，其用于卵巢癌(nct02028117)、转移性或晚期上皮肿瘤，诸如结肠直肠癌、膀胱癌、头颈部鳞状细胞癌和唾液腺癌(nct02636036)；oncos-102(targovax/先前称为oncos)，其为一种经工程改造以表达gm-csf的腺病毒，其用于黑素瘤(nct03003676)和腹膜疾病、结肠直肠癌或卵巢癌(nct02963831)；gl-onc1(glv-1h68/glv-1h153,genelux gmbh)，其为经工程改造以分别表达β-半乳糖苷酶(β-gal)/β-葡糖醛酸酶或β-gal/人类碘化钠同向运输蛋白(hnis)的牛痘病毒，其正经研究用于腹膜癌病(nct01443260)、输卵管癌症、卵巢癌(nct02759588)；或cg0070(cold genesys)，其为一种经工程改造以表达gm-csf的腺病毒，其用于膀胱癌(nct02365818)。
[0731]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自：jx-929(sillajen/先前称jennerex biotherapeutics)，其为一种经工程改造以表达胞嘧啶脱胺酶的tk缺陷型和牛痘生长因子缺陷型牛痘病毒，其能够将前药5-氟胞嘧啶转化为细胞毒性药物5-氟尿嘧啶；tg01和tg02(targovax/先前称为oncos)，其为靶向难以治疗的ras突变的基于肽的免疫治疗剂；和tilt-123(tilt biotherapeutics)，其为一种被称为ad5/3-e2f-δ24-htnfα-ires-hil20的经工程改造的腺病毒；和vsv-gp(viratherapeutics)，其为一种经工程改造以表达淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lcmv)的糖蛋白(gp)的水泡性口炎病毒(vsv)，其可进一步经工程改造以表达经设计以提升抗原特异性cd8
t细胞反应的抗原。
[0732]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为经工程改造以表达嵌合抗原受体或car的t细胞。经工程改造以表达此嵌合抗原受体的t细胞称为car-t细胞。
[0733]
已构建car，其由以下组成：结合结构域，其可来源于天然配体；单链可变片段(scfv)，其来源于对细胞表面抗原具有特异性的单克隆抗体，与作为t细胞受体(tcr)的功能末端的胞内结构域(诸如能够在t淋巴细胞中产生活化信号的来自tcr的cd3-ζ信号传导域)融合。在抗原结合时，此类car连接至效应细胞中的内源性信号传导路径且产生与由tcr复合物引发的那些活化信号类似的活化信号。
[0734]
例如，在一些实施方案中，car-t细胞为美国专利8,906,682(june等人；以全文引用的方式并入本文中)中所述的细胞中的一种，该专利公开car-t细胞，其经工程改造以包含具有抗原结合结构域(诸如结合至cd19的结构域)的胞外结构域，与t细胞抗原受体复合物ζ链(诸如cd3ζ)的胞内信号传导域融合。当在t细胞中表达时，car能够基于抗原结合特异性来重新引导抗原识别。在cd19的情况下，抗原表达在恶性b细胞上。当前在广泛范围的适应症中采用car-t的超过200个临床试验正在进展中。[https://clinicaltrials.gov/ct2/results？term＝chimeric antigen receptors&pg＝1]。
[0735]
在一些实施方案中，免疫刺激剂为视黄酸受体相关孤儿受体γ(rorγt)的活化剂。rorγt为在cd4 (th17)和cd8 (tc17)t细胞的17型效应子子集的分化和维持以及表达il-17的先天性免疫细胞亚群(诸如nk细胞)的分化中具有关键作用的转录因子。在一些实施方案中，rorγt的活化剂为lyc-55716(lycera)，当前在用于治疗实体肿瘤(nct02929862)的临床试验中对其进行评估。
[0736]
在一些实施方案中，免疫刺激剂为toll样受体(tlr)的激动剂或活化剂。适合的tlr的活化剂包括tlr9的激动剂或活化剂，诸如sd-101(dynavax)。sd-101为免疫刺激cpg，正对其进行研究以供用于b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和其他淋巴瘤(nct02254772)。可用于本发明中的tlr8的激动剂或活化剂包括motolimod(vtx-2337,ventirx pharmaceuticals)，正对其进行研究以用于头颈部鳞状细胞癌(nct02124850)和卵巢癌(nct02431559)。
[0737]
可用于本发明中的其他免疫肿瘤学药剂包括：乌瑞芦单抗(bms-663513,bristol-myers squibb)，其为一种抗cd137单克隆抗体；伐立鲁单抗(cdx-1127,celldex therapeutics)，其为一种抗cd27单克隆抗体；bms-986178(bristol-myers squibb)，其为一种抗ox40单克隆抗体；利瑞鲁单抗(iph2102/bms-986015,innate pharma,bristol-myers squibb)，其为一种抗kir单克隆抗体；莫那利珠单抗(monalizumab，iph2201,innate pharma,astrazeneca)，其为一种抗nkg2a单克隆抗体；安德利昔单抗(andecaliximab，gs-5745,gilead sciences)，其为一种抗mmp9抗体；mk-4166(merck&co.)，其为一种抗gitr单克隆抗体。
[0738]
在一些实施方案中，免疫刺激剂选自埃罗妥珠单抗(elotuzumab)、米伐木肽(mifamurtide)、toll样受体的激动剂或活化剂和rorγt的活化剂。
[0739]
在一些实施方案中，免疫刺激治疗剂为重组人类白介素15(rhil-15)。rhil-15已在临床中作为黑素瘤和肾细胞癌(nct01021059和nct01369888)和白血病(nct02689453)的疗法进行测试。在一些实施方案中，免疫刺激剂为重组人类白介素12(rhil-12)。在一些实施方案中，基于il-15的免疫治疗剂为异二聚il-15(hetil-15,novartis/admune)，一种由与可溶性il-15结合蛋白il-15受体α链复合的内源性il-15的合成形式构成的融合复合物(il15:sil-15ra)，其已在针对黑素瘤、肾细胞癌、非小细胞肺癌和头颈部鳞状细胞癌
(nct02452268)的1期临床试验中进行测试。在一些实施方案中，重组人类白介素12(rhil-12)为nm-il-12(neumedicines,inc.)、nct02544724或nct02542124。
[0740]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自jerry l.adams等人,“big opportunities for small molecules in immuno-oncology,”cancer therapy 2015,vol.14，第603-622页中所描述的免疫肿瘤学药剂，该文献的内容以全文引用的方式并入本文中。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自jerry l.adams等人的表1中所描述的实例。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为选自jerry l.adams等人的表2中列出的那些的靶向免疫肿瘤学靶标的小分子。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为选自jerry l.adams等人的表2中列出的那些的小分子药剂。
[0741]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自peter l.toogood,“small molecule immuno-oncology therapeutic agents,”bioorganic&medicinal chemistry letters 2018,vol.28，第319-329页中所描述的小分子免疫肿瘤学药剂，该文献的内容以全文引用的方式并入本文中。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为靶向如peter l.toogood中所描述的路径的药剂。
[0742]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自sandra l.ross等人,“bispecific t cell engagerantibody constructs can mediate bystander tumor cell killing”,plos one 12(8):e0183390中所描述的那些的免疫肿瘤学药剂，该文献的内容以全文引用的方式并入本文中。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为双特异性t细胞接合子抗体构建体。在一些实施方案中，双特异性t细胞接合子抗体构建体为cd19/cd3双特异性抗体构建体。在一些实施方案中，双特异性t细胞接合子抗体构建体为egfr/cd3双特异性抗体构建体。在一些实施方案中，双特异性t细胞接合子抗体构建体活化t细胞。在一些实施方案中，双特异性t细胞接合子抗体构建体活化t细胞，其释放诱导旁邻细胞上细胞间黏附分子1(icam-1)和fas的上调的细胞因子。在一些实施方案中，双特异性t细胞接合子抗体构建体活化t细胞，其导致诱导的旁邻细胞溶解。在一些实施方案中，旁邻细胞在实体肿瘤中。在一些实施方案中，溶解的旁邻细胞接近活化的t细胞。在一些实施方案中，旁邻细胞包含肿瘤相关抗原(taa)阴性癌细胞。在一些实施方案中，旁邻细胞包含egfr阴性癌细胞。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为阻断pd-l1/pd1轴和/或ctla4的抗体。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为离体扩增的肿瘤浸润性t细胞。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为将t细胞与肿瘤相关的表面抗原(taa)直接连接的双特异性抗体构建体或嵌合抗原受体(car)。
[0743]
示例性检查点抑制剂
[0744]
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂为如本文中所述的免疫检查点抑制剂。
[0745]
如本文中所使用的术语“检查点抑制剂”涉及适用于防止癌细胞避开患者的免疫系统的药剂。抗肿瘤免疫破坏的主要机制之一称为“t细胞耗竭”，其由长期暴露于已引起抑制受体的上调的抗原引起。这些抑制受体充当免疫检查点以便防止不受控制的免疫反应。
[0746]
pd-1和共抑制受体(诸如细胞毒性t淋巴细胞抗原4(ctla-4)、b和t淋巴细胞衰减因子(btla；cd272)、t细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域-3(tim-3)、淋巴细胞活化基因-3(lag-3；cd223)和其他)通常称为检查点调控子。其充当允许胞外信息指示细胞周期进程和
其他胞内信号传导过程是否应继续的分子“守门因子(gatekeeper)”。
[0747]
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂为针对pd-1的抗体。pd-1结合于程序性细胞死亡1受体(pd-1)以防止受体结合于抑制性配体pdl-1，由此压制肿瘤抑制宿主抗肿瘤免疫反应的能力。
[0748]
在一些实施方案中，检查点抑制剂为生物治疗剂或小分子。在一些实施方案中，检查点抑制剂为单克隆抗体、人源化抗体、完全人类抗体、融合蛋白或其组合。在一些实施方案中，检查点抑制剂抑制选自以下的检查点蛋白：ctla-4、pdl1、pdl2、pd1、b7-h3、b7-h4、btla、hvem、tim3、gal9、lag3、vista、kir、2b4、cd160、cgen-15049、chk1、chk2、a2ar、b-7家族配体或其组合。在一些实施方案中，检查点抑制剂与选自以下的检查点蛋白的配体相互作用：ctla-4、pdl1、pdl2、pd1、b7-h3、b7-h4、btla、hvem、tim3、gal9、lag3、vista、kir、2b4、cd160、cgen-15049、chk1、chk2、a2ar、b-7家族配体或其组合。在一些实施方案中，检查点抑制剂为免疫刺激剂、t细胞生长因子、白介素、抗体、疫苗或其组合。在一些实施方案中，白介素为il-7或il-15。在一些实施方案中，白介素为糖基化il-7。在一个额外方面中，疫苗为树突细胞(dc)疫苗。
[0749]
检查点抑制剂包括以统计学上显著方式阻断或抑制免疫系统的抑制路径的任何药剂。此类抑制剂可包括小分子抑制剂、或可包括结合于且阻断或抑制免疫检查点受体的抗体或其抗原结合片段、或结合于且阻断或抑制免疫检查点受体配体的抗体。可被靶向以用于阻断或抑制的说明性检查点分子包括但不限于ctla-4、pdl1、pdl2、pd1、b7-h3、b7-h4、btla、hvem、gal9、lag3、tim3、vista、kir、2b4(属于cd2分子家族，且表达在所有nk、γδ和记忆cd8

(αβ)t细胞上)、cd160(亦称为by55)、cgen-15049、chk1和chk2激酶、a2ar和各种b-7家族配体。b7家族配体包括但不限于b7-1、b7-2、b7-dc、b7-h1、b7-h2、b7-h3、b7-h4、b7-h5、b7-h6和b7-h7。检查点抑制剂包括结合于且阻断或抑制以下中的一种或多种的活性的抗体或其抗原结合片段、其他结合蛋白、生物治疗剂或小分子：ctla-4、pdl1、pdl2、pd1、btla、hvem、tim3、gal9、lag3、vista、kir、2b4、cd160和cgen-15049。说明性免疫检查点抑制剂包括但不限于曲美单抗(ctla-4阻断抗体)、抗ox40、pd-l1单克隆抗体(抗b7-hl；medi4736)、mk-3475(pd-1阻断物)、纳武单抗(抗pd1抗体)、ct-011(抗pd1抗体)、by55单克隆抗体、amp224(抗pdl1抗体)、bms-936559(抗pdl1抗体)、mpldl3280a(抗pdl1抗体)、msb0010718c(抗pdl1抗体)和伊匹单抗(抗ctla-4检查点抑制剂)。检查点蛋白配体包括但不限于pd-l1、pd-l2、b7-h3、b7-h4、cd28、cd86和tim-3。
[0750]
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自pd-1拮抗剂、pd-l1拮抗剂和ctla-4拮抗剂。在一些实施方案中，检查点抑制剂选自由以下组成的组：纳武单抗伊匹单抗和帕博利珠单抗在一些实施方案中，检查点抑制剂选自纳武单抗(抗pd-1抗体，bristol-myers squibb)；帕博利珠单抗(抗pd-1抗体，merck)；伊匹单抗(抗ctla-4抗体，bristol-myers squibb)；德瓦鲁单抗(抗pd-l1抗体，astrazeneca)；和阿特珠单抗(抗pd-l1抗体，genentech)。
[0751]
在一些实施方案中，检查点抑制剂选自由以下组成的组：兰利珠单抗(mk-3475)、纳武单抗(bms-936558)、匹地利珠单抗(ct-011)、amp-224、mdx-1105、medi4736、
mpdl3280a、bms-936559、伊匹单抗、利瑞鲁单抗、iph2101、帕博利珠单抗和曲美单抗。
[0752]
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂为：regn2810(regeneron)，其是一种在患有基底细胞癌(nct03132636)、nsclc(nct03088540)、皮肤鳞状细胞癌(nct02760498)、淋巴瘤(nct02651662)和黑素瘤(nct03002376)的患者中测试的抗pd-1抗体；匹地利珠单抗(curetech)，亦称为ct-011，其是一种结合于pd-1的抗体，用于针对弥漫性大b细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤的临床试验；阿维鲁单抗(pfizer/merck kgaa)，亦称为msb0010718c)，其是一种完全人类igg1抗pd-l1抗体，用于针对非小细胞肺癌、梅克尔氏细胞癌、间皮瘤、实体肿瘤、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、头颈癌和胃癌的临床试验；或pdr001(novartis)，其是一种结合于pd-1的抑制性抗体，用于针对非小细胞肺癌、黑素瘤、三阴性乳腺癌和晚期或转移性实体肿瘤的临床试验。曲美单抗(cp-675,206；astrazeneca)为已在针对大量适应证的临床试验中进行研究的抗ctla-4的完全人类单克隆抗体，所述适应证包括：间皮瘤、结肠直肠癌、肾癌、乳腺癌、肺癌和非小细胞肺癌、胰管腺癌、胰脏癌、生殖细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、前列腺癌、子宫内膜癌、肝脏中的转移癌、肝癌、大b细胞淋巴瘤、卵巢癌、子宫颈癌、转移性间变性甲状腺癌、尿道上皮癌、输卵管癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、软组织肉瘤和黑素瘤。agen-1884(agenus)为在针对晚期实体肿瘤(nct02694822)的1期临床试验中进行研究的抗ctla4抗体。
[0753]
在一些实施方案中，检查点抑制剂为含有t细胞免疫球蛋白黏蛋白的蛋白3(tim-3)的抑制剂。可用于本发明中的tim-3抑制剂包括tsr-022、ly3321367和mbg453。tsr-022(tesaro)为在实体肿瘤(nct02817633)中进行研究的抗tim-3抗体。ly3321367(eli lilly)为在实体肿瘤(nct03099109)中进行研究的抗tim-3抗体。mbg453(novartis)为在晚期恶性病(nct02608268)中进行研究的抗tim-3抗体。
[0754]
在一些实施方案中，检查点抑制剂为具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体或tigit(一种在某些t细胞和nk细胞上的免疫受体)的抑制剂。可用于本发明中的tigit抑制剂包括：bms-986207(bristol-myers squibb)，一种抗tigit单克隆抗体(nct02913313)；omp-313m32(oncomed)；和抗tigit单克隆抗体(nct03119428)。
[0755]
在一些实施方案中，检查点抑制剂为淋巴细胞活化基因-3(lag-3)的抑制剂。可用于本发明中的lag-3抑制剂包括bms-986016和regn3767和imp321。bms-986016(bristol-myers squibb，一种抗lag-3抗体)在神经胶母细胞瘤和神经胶质肉瘤(nct02658981)中进行研究。regn3767(regeneron)也是一种抗lag-3抗体且在恶性病(nct03005782)中进行研究。imp321(immutep s.a.)为lag-3-ig融合蛋白，其在黑素瘤(nct02676869)、腺癌(nct02614833)和转移性乳腺癌(nct00349934)中进行研究。
[0756]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括ox40激动剂。在临床试验中进行研究的ox40激动剂包括：pf-04518600/pf-8600(pfizer)，其为一种用于转移性肾癌(nct03092856)和晚期癌症和肿瘤(nct02554812；nct05082566)中的激动性抗ox40抗体；gsk3174998(merck)，其为一种用于1期癌症试验(nct02528357)中的激动性抗ox40抗体；medi0562(medimmune/astrazeneca)，其为一种用于晚期实体肿瘤(nct02318394和nct02705482)中的激动性抗ox40抗体；medi6469，其为一种用于患有结肠直肠癌(nct02559024)、乳腺癌(nct01862900)、头颈癌(nct02274155)和转移性前列腺癌(nct01303705)的患者中的激动
性抗ox40抗体(medimmune/astrazeneca)；和bms-986178(bristol-myers squibb)，其为一种用于晚期癌症(nct02737475)中的激动性抗ox40抗体。
[0757]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括cd137(亦称为4-1bb)激动剂。在临床试验中进行研究的cd137激动剂包括：乌托鲁单抗(utomilumab，pf-05082566，pfizer)，其为一种用于弥漫性大b细胞淋巴瘤(nct02951156)和晚期癌症和肿瘤(nct02554812和nct05082566)中的激动性抗cd137抗体；乌瑞芦单抗(bms-663513，bristol-myers squibb)，其为一种用于黑素瘤和皮肤癌(nct02652455)和神经胶母细胞瘤和神经胶质肉瘤(nct02658981)中的激动性抗cd137抗体；和ctx-471(compass therapeutics)，其为一种用于转移性或局部晚期恶性病(nct03881488)中的激动性抗cd137抗体。
[0758]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括cd27激动剂。在临床试验中进行研究的cd27激动剂包括：伐立鲁单抗(cdx-1127，celldex therapeutics)，其为一种用于鳞状细胞头颈癌、卵巢癌、结肠直肠癌、肾细胞癌和神经胶母细胞瘤(nct02335918)、淋巴瘤(nct01460134)和神经胶质瘤和星形细胞瘤(nct02924038)中的激动性抗cd27抗体。
[0759]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(gitr)激动剂。在临床试验中进行研究的gitr激动剂包括：trx518(leap therapeutics)，其为一种用于恶性黑素瘤和其他恶性实体肿瘤(nct01239134和nct02628574)中的激动性抗gitr抗体；gwn323(novartis)，其为一种用于实体肿瘤和淋巴瘤(nct02740270)中的激动性抗gitr抗体；incagn01876(incyte/agenus)，其为一种用于晚期癌症(nct02697591和nct03126110)中的激动性抗gitr抗体；mk-4166(merck)，其为一种用于实体肿瘤(nct02132754)中的激动性抗gitr抗体；和medi1873(medimmune/astrazeneca)，其为一种用于晚期实体肿瘤(nct02583165)中的具有人类igg1 fc结构域的激动性六聚gitr-配体分子。
[0760]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括诱导性t细胞共刺激剂(icos，亦称为cd278)激动剂。在临床试验中进行研究的icos激动剂包括：medi-570(medimmune)，其为一种用于淋巴瘤(nct02520791)中的激动性抗icos抗体；gsk3359609(merck)，其为一种用于1期(nct02723955)中的激动性抗icos抗体；jtx-2011(jounce therapeutics)，其为一种用于1期(nct02904226)中的激动性抗icos抗体。
[0761]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括杀伤igg样受体(kir)抑制剂。在临床试验中进行研究的kir抑制剂包括：利瑞鲁单抗(iph2102/bms-986015，innate pharma/bristol-myers squibb)，其为一种用于白血病(nct01687387、nct02399917、nct02481297、nct02599649)、多发性骨髓瘤(nct02252263)和淋巴瘤(nct01592370)中的抗kir抗体；iph2101(1-7f9，innate pharma)，其用于骨髓瘤(nct01222286和nct01217203)；和iph4102(innatepharma)，其为一种用于淋巴瘤(nct02593045)中的结合于长胞质尾的三个结构域的抗kir抗体(kir3dl2)。
[0762]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括cd47与信号调节蛋白α(sirpa)之间的相互作用的cd47抑制剂。在临床试验中进行研究的cd47/sirpa抑制剂包括：alx-148(alexo therapeutics)，其为一种用于1期(nct03013218)中的结合于cd47且防止cd47/sirpa介导的信号传导的(sirpa)的拮抗性变异体；tti-621(sirpa-fc，trillium therapeutics)，其为一种的通过连接sirpa的n端cd47结合结构域与人类igg1的fc结构域而形成的可溶性重
组融合蛋白，通过结合人类cd47而起作用且防止其将其“不许吞噬(do not eat)”信号递送至巨噬细胞，正处在1期临床试验(nct02890368和nct02663518)中；cc-90002(celgene)，其为一种用于白血病(nct02641002)中的抗cd47抗体；和hu5f9-g4(forty seven,inc.)，其用于结肠直肠肿瘤和实体肿瘤(nct02953782)、急性骨髓性白血病(nct02678338)和淋巴瘤(nct02953509)。
[0763]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括cd73抑制剂。在临床试验中进行研究的cd73抑制剂包括medi9447(medimmune)，其为一种用于实体肿瘤(nct02503774)中的抗cd73抗体；和bms-986179(bristol-myers squibb)，其为一种用于实体肿瘤(nct02754141)中的抗cd73抗体。
[0764]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括干扰素基因刺激蛋白(sting，亦称为跨膜蛋白173或tmem173)的激动剂。在临床试验中进行研究的sting的激动剂包括：mk-1454(merck)，其为一种用于淋巴瘤(nct03010176)中的激动性合成环状二核苷酸；和adu-s100(miw815，aduro biotech/novartis)，其为一种用于1期(nct02675439和nct03172936)中的激动性合成环状二核苷酸。
[0765]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括csf1r抑制剂。在临床试验中进行研究的csf1r抑制剂包括：吡昔替尼(pexidartinib，plx3397，plexxikon)，其为一种用于结肠直肠癌、胰脏癌、转移性和晚期癌症(nct02777710)以及黑素瘤、非小细胞肺癌、鳞状细胞头颈癌、胃肠基质瘤(gist)和卵巢癌(nct02452424)中的csf1r小分子抑制剂；和imc-cs4(ly3022855，lilly)，其为一种用于胰脏癌(nct03153410)、黑素瘤(nct03101254)和实体肿瘤(nct02718911)中的抗csf-1r抗体；以及blz945(4-[2((1r,2r)-2-羟基环己基氨基)-苯并噻唑-6-基氧基]-吡啶-2-羧酸甲基酰胺，novartis)，其为一种用于晚期实体肿瘤(nct02829723)中的csf1r的经口可用抑制剂。
[0766]
可用于本发明中的检查点抑制剂包括nkg2a受体抑制剂。在临床试验中进行研究的nkg2a受体抑制剂包括莫那利珠单抗(iph2201，innate pharma)，其为一种用于头颈肿瘤(nct02643550)和慢性淋巴细胞性白血病(nct02557516)中的抗nkg2a抗体。
[0767]
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自纳武单抗、帕博利珠单抗、伊匹单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、阿特珠单抗或匹地利珠单抗。
[0768]
实施例
[0769]
以下实施例说明上文所述的发明；然而，其不意欲以任何方式限制本发明的范畴。本发明的医药化合物、组合和组合物的有利效果也可以通过相关领域技术人员知晓的其他测试模型来确定
[0770]
实施例1：转录图谱分析研究
[0771]
使用bcy12491的图谱分析研究
[0772]
对于转录和免疫组织化学(ihc)分析，使6-8周龄雌性hucd137-c57b/6j小鼠(biocytogen)皮下植入1
×
106个mc38细胞。当平均肿瘤体积达到约240mm3时，将小鼠随机分至治疗组中，并且用媒介物(25mm组氨酸、10％蔗糖，ph7)、15mg/kg bcy12491、15mg/kg bcy13626(非结合对照)进行静脉内治疗，或用2mg/kg抗cd137抗体乌瑞芦单抗进行腹膜内治疗。治疗按照q3d给与三个剂量，经由测径规量测来监测肿瘤生长，且在第6天在最后一次给药后1小时采集肿瘤组织。将肿瘤组织的一部分用于rna分离以进行转录分析，并且将肿
瘤组织的一部分用于福尔马林固定的石蜡包埋(ffpe)样本制备以进行ihc分析。rna使用rnaeasy试剂盒(qiagen)自肿瘤组织分离且使用来自100ng rna/肿瘤的ncounter mouse pancancer io 360组(nanostring)进行转录分析。使用具有高级分析探针组ns_mm_io_360_v1.0(nanostring)的nsolver分析软件分析数据。使用抗小鼠cd8抗体(abcam，#ab217344)和ventana discovery omnimap抗兔-hrp试剂盒(ventana#7604310)在ffpe组织切片中对cd8 肿瘤浸润性细胞进行染色。
[0773]
数据显示在图1中。
[0774]
发现：转录分析表明，当与来自经媒介物治疗的小鼠的肿瘤相比时，在epha2杂串联双环肽复合物bcy12491治疗后，肿瘤组织中诸如细胞毒性细胞评分、t细胞评分和巨噬细胞细胞评分的免疫细胞评分显著增加。抗cd137抗体治疗也显著增加肿瘤组织中的细胞毒性细胞评分和t细胞评分，但程度低于bcy12491。在来自非结合对照(bcy13626)治疗的动物的肿瘤组织中未观察到免疫细胞评分的变化。肿瘤组织中的cd8 细胞的ihc分析证实，当与来自经媒介物或非结合剂bcy13626治疗的小鼠的肿瘤相比时，来自经bcy12491治疗的小鼠的肿瘤中的cd8 细胞强烈浸润。还在来自经抗cd137抗体治疗的小鼠的肿瘤中观察到cd8 细胞浸润的一些增加。肿瘤组织中免疫细胞评分和cd8 细胞的这些变化表明，epha2/cd137杂串联双环肽复合物bcy12491对肿瘤组织中的cd137的激动作用引起肿瘤浸润性免疫细胞和免疫反应的显著调节(增加)。
[0775]
使用bt7480的研究
[0776]
对于转录和免疫组织化学(ihc)分析，使6-8周龄雌性hucd137-c57b/6j小鼠(biocytogen)皮下植入1
×
106个mc38#13细胞(经工程改造以表达柄蛋白-4的mc38细胞)。当平均肿瘤体积达到约255mm3时，将小鼠随机分至治疗组中以接受媒介物、bt7480(bcy00011863)、非结合剂bcy对照bcy00012797(bcy12797)或αcd137抗体(乌瑞芦单抗类似物)。在0h和24h时以5mg/kg(在25mm组氨酸hcl、10％蔗糖(ph7)中；媒介物)静脉内给药bt7480和其非结合对照，且以在pbs biw(0h，72h)中的2mg/kg剂量和时间表以腹膜内给药乌瑞芦单抗类似物。在24h(在0h给药后)、48h(在最后一次0h和24h给药之后24h)、96h(在最后一次0h和24h给药之后72h)和144h(在最后一次0h和24h给药之后120h)时采集来自经bt7480治疗的小鼠的肿瘤。在治疗开始之后144h采集来自经αcd137治疗的小鼠的肿瘤。在0h给药之后24h和144h(最后一次0h和24h给药之后120h)采集来自经媒介物治疗的小鼠的肿瘤。rna使用rnaeasy试剂盒(qiagen)自肿瘤组织分离且使用来自100ng rna/肿瘤的ncounter mouse pancancer io 360组(nanostring)进行转录分析。使用具有高级分析探针组ns_mm_io_360_v1.0(nanostring)的nsolver分析软件分析数据。
[0777]
数据显示在图2至图4中。
[0778]
发现：转录分析表明一些t细胞趋化性趋化因子/细胞因子(诸如ccl1、ccl17和ccl24等，其被认为由骨髓细胞分泌，从而引起t细胞在趋化因子分泌部位中的募集)的mrna的显著早期(24小时时间点)增加。转录分析还表明，当与来自经媒介物治疗的小鼠的肿瘤相比时，在bt7480治疗后，肿瘤组织中诸如细胞毒性细胞评分和巨噬细胞细胞评分的免疫细胞评分显著增加。巨噬细胞细胞评分在bt7480施用之后24h开始增加，自24h媒介物读数至48h显著增加。另一方面，当与在144h的经媒介物治疗的肿瘤相比细胞毒性细胞评分显著增加时，细胞毒性细胞评分在治疗开始之后48小时开始增加且增加直至144h。将响应
bt7480的细胞毒性细胞评分以及ccl1、ccl17和ccl24的标准化mrna计数叠加证实ccl1、ccl17和ccl24转录的增加如何先于细胞毒性细胞评分的增加。
[0779]
将响应bt7480的巨噬细胞和细胞毒性细胞评分叠加证实巨噬细胞的细胞评分增加如何先于细胞毒性细胞评分的增加。
[0780]
转录分析表明，一些不同免疫检查点的mrna增加或显著增加的趋势，所述免疫检查点包括ctla-4(ctla4)、pd-1(pdcd1)、pd-l1(cd274)、lag3(lag3)、tim3(havcr2)、pd-l2(pdcd1lg2)和tigit(tigit)，这支持bt7480与检查点抑制剂组合的概念。
[0781]
实施例2：使用bcy12491和帕博利珠单抗组合的功效研究
[0782]
对于肿瘤生长分析，使6-8周龄雌性hucd137/hupd-1-c57b/6j小鼠(biocytogen)皮下植入1
×
106个mc38细胞。当平均肿瘤体积达到约92mm3时，将小鼠随机分至治疗组中且用媒介物(25mm组氨酸、10％蔗糖，ph7)、5mg/kg bcy12491(0，24h)进行静脉内治疗，或用3mg/kg抗pd-1抗体帕博利珠单抗或bcy12491与帕博利珠单抗的组合进行腹膜内治疗。组合治疗以三个不同给药时间表给与：在第0天同时开始的bcy12491和帕博利珠单抗治疗、在第1天开始的bcy12491治疗和在第5天开始的帕博利珠单抗治疗，或在第0天开始的帕博利珠单抗治疗和在第5天开始的bcy12491治疗。每周给与治疗持续四次给药，且经由测径规量测来监测肿瘤生长。
[0783]
数据显示在图5和图6中。
[0784]
发现：当与媒介物对照相比时，bcy12491和帕博利珠单抗单药疗法和其组合均显示出显著的抗肿瘤活性(所有*＊*p＜0.0001，混合效应分析与dunnett后检验，在d18将治疗剂与媒介物进行比较)。此外，组合治疗比单药疗法中的任一个更加有效(*＊*p＜0.0001，混合效应分析与dunnett后检验，在d20将组合与单药疗法进行比较)，从而到第22天引起所有经治疗动物中的完全响应。相比较而言，这些治疗方案和时间表引起bcy12491单药疗法治疗群体中的2/10完全响应和帕博利珠单抗单药疗法治疗群体中的3/10完全响应。bcy12491与帕博利珠单抗的组合的交替定序(在第0天开始的bcy12491治疗和在第5天开始的帕博利珠单抗治疗，或反之)也产生显著的抗肿瘤活性(两者*＊*p＜0.0001，混合效应分析与dunnett后检验，在d18将治疗剂与媒介物进行比较)，两个时间表到第42天在经治疗的小鼠中引起9/10完全响应(在第0天开始的bcy12491治疗和在第5天开始的帕博利珠单抗治疗)和8/10完全响应(在第0天开始的帕博利珠单抗治疗和在第5天开始的bcy12491治疗)。
[0785]
实施例3：使用bcy11864和抗pd-1组合的功效研究
[0786]
对于肿瘤生长分析，使6-8周龄雌性balb/c-hucd137小鼠(gempharmatech)皮下植入3
×
10 e5个ct26#7细胞(经工程改造以过表达柄蛋白-4的ct26细胞)。当平均肿瘤体积达到约80mm3时，将小鼠随机分至治疗组中且用媒介物(25mm组氨酸、10％蔗糖，ph7)、10mg/kg bcy11864(0，24h)进行静脉内治疗，或用10mg/kg抗pd-1抗体(rmp1-14)或bcy11864与抗pd-1抗体的组合进行腹膜内治疗。每周给与治疗，且经由测径规量测来监测肿瘤生长。具有＞2000mm3肿瘤的动物在其已达到人道终点时被处死。在治疗开始之后第66天时终止研究，此时仅2只动物(均在组合治疗组中)留在研究中(一只完全响应者，一只肿瘤大小仍在消退)。
[0787]
数据显示在图7中。
[0788]
发现：向抗pd-1单药疗法添加bcy11864显著(p＝0.004，mantel-cox对数秩检验，
其将抗pd-1与抗pd-1 bcy11864组合组进行比较)增加携带ct26#7的小鼠的存活期(结果量测为达到人道终点(即肿瘤体积＞2000mm3)的时间)。
[0789]
实施例4.使用bt7480与抗pd-1和抗ctla-4组合的功效研究
[0790]
对于肿瘤生长分析，使6-8周龄雌性c57bl/6j-hucd137小鼠(biocytogen)皮下植入1
×
10 e6个mc38#13细胞(经工程改造以过表达柄蛋白-4的mc38细胞)。当平均肿瘤体积达到约100mm3时，将小鼠随机分至治疗组中且用媒介物(25mm组氨酸、10％蔗糖，ph7)、1mg/kg bt7480、5mg/kg抗pd-1(rmp1-14)、5mg/kg抗ctla-4(9h10)或bt7480/抗pd-1和bt7480/抗ctla-4组合进行腹膜内治疗。每周两次(biw)给与治疗持续2周，且经由测径规量测来监测肿瘤生长直至治疗开始后的第33天。具有＞2000mm3肿瘤的动物在其已达到人道终点时被处死。
[0791]
数据显示在图8和图9中。
[0792]
发现：向抗pd-1单药疗法添加bt7480将完全响应率(cr)自0/8(在bt7480和抗pd-1单药疗法组中)增加至bt7480/抗pd-1组合治疗组中的2/8。到治疗开始后的第33天，向抗ctla-4单药疗法添加bt7480将完全响应率(cr)自0/8或1/8(分别在bt7480和抗ctla-4单药疗法组中)增加至bt7480/抗ctla-4组合治疗组中的4/8。此外，向抗ctla-4单药疗法添加bt7480显著(p＝0.0499，mantel-cox对数秩检验，将抗ctla-4与抗ctla-4 bt7480组合组进行比较)增加携带mc38#13的小鼠的存活期(结果量测为达到人道终点(即肿瘤体积＞2000mm3)的时间)。
[0793]
实施例5.使用bt7455的转录图谱分析研究
[0794]
对于bt7455在免疫肿瘤微环境中的影响的转录图谱分析，使6-8周龄雌性hucd137-c57b/6j小鼠(biocytogen)皮下植入1
×
10 e6个mc38细胞。当平均肿瘤体积达到约350mm3时，将小鼠随机分至治疗组中以接受媒介物、bt7455、αcd137抗体(乌瑞芦单抗类似物)或αpd-1抗体。在0h和24h时以8mg/kg(在25mm组氨酸hcl、10％蔗糖(ph7)中；媒介物)静脉内给药bt7455，且在0h时以在pbs中2mg/kg(乌瑞芦单抗类似物)或10mg/kg(αpd-1抗体)腹膜内给药乌瑞芦单抗类似物和αpd-1抗体。在治疗开始之后24h、48h和144h时采集来自经媒介物、bt7455、乌瑞芦单抗类似物和αpd-1抗体治疗的小鼠的肿瘤。rna使用rnaeasy试剂盒(qiagen)自肿瘤组织分离且使用来自100ng rna/肿瘤的ncounter mouse pancancer io 360组(nanostring)进行转录分析。使用具有高级分析探针组ns_mm_io_360_v1.0(nanostring)的nsolver分析软件分析数据。
[0795]
数据显示在图10至图13中。
[0796]
发现：转录分析表明，在bt7455治疗之后一些不同免疫检查点的mrna显著增加，所述免疫检查点包括ctla-4(ctla4)、pd-1(pdcd1)、pd-l1(cd274)、lag3(lag3)、tim3(havcr2)、pd-l2(pdcd1lg2)和tigit(tigit)，这支持bt7455与检查点抑制剂组合的概念。转录分析还表明一些t细胞趋化性趋化因子/细胞因子(诸如ccl1、ccl17和ccl24等，其被认为由骨髓细胞分泌，从而引起t细胞在趋化因子分泌部位中的募集)的mrna的显著早期(24至48小时时间点)增加。转录分析还表明，当与来自经媒介物或抗pd-1或抗cd137治疗的小鼠的肿瘤相比时，在bt7455治疗后，肿瘤组织中的免疫细胞评分(诸如细胞毒性细胞评分)显著增加。bt7455治疗引发一些基因集的显著早期(48小时)调节，所述基因集包括与细胞因子和趋化因子信号传导、细胞毒性、细胞凋亡和nk-κb信号传导基因集相关的基因集。