技术特征：
1.一种马蓝组织培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)消毒：所述消毒包括初步清洗和深度消毒；(2)诱导培养：将消毒后的外植体黑色死亡部分切除，无菌水多次清洗，后移入培养皿，用无菌滤纸吸干水分，将外植体切取为0.5～1.0cm的茎段，接种到诱导培养基中进行诱导培养；(3)增殖培养：将步骤(2)得到的生芽生长到1-2cm时，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后在25℃～28℃下进行暗培养1～3d，然后置于每天光照10～12h，光照强度为2000～3000lx的条件下进行培养；(4)生根培养：步骤(3)的丛生芽长至2cm时，置于生根培养基上诱导生根；(5)炼苗移栽：步骤(4)的幼苗根生长到1cm时，打开培养瓶炼苗3～5d，然后将幼苗取出，移栽于装有砂质壤土的营养袋或苗圃地中；浇透水，搭小拱棚覆盖塑料膜保湿，每隔2～3d少量浇水，幼苗长出新叶后缓慢增加光照，降低湿度，直至完全见光，然后进行常规管理。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述初步清洗包括如下步骤：将外植体用洗衣粉清洗干净，置于流水中冲洗0.5～1.0h，无菌水冲洗2次，移入乙二胺四乙酸二钠溶液中清洗5～20min，蒸馏水浸泡10～20min，再将所述外植体移入十二烷基磺酸钠溶液清洗10～20min，清洗完毕后移入无菌水中洗净、晾干、紫外灭菌30～60min；进一步地，所述乙二胺四乙酸二钠溶液中清洗5min；蒸馏水浸泡10min，紫外灭菌30min。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述深度消毒包括如下步骤：将所述外植体于75％的酒精漂洗20s，无菌水冲洗2次，后移入8％的双氧水震荡消毒60s，消毒后的马蓝组织移入无菌水清洗3～5min，再次移入0.1％氯化汞中消毒5min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述外植体选自嫩梢茎段、腋芽茎段。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙二胺四乙酸二钠溶液浓度为1mm～3mm，优选为1mm。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述十二烷基磺酸钠溶液的浓度为0.1％。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述诱导培养基包括：ms培养基、1.0～3.0mg/l 6-ba、0.1～2.0mg/l naa、15～30g/l蔗糖、3.5～6.0g/l琼脂。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述诱导培养基包括：ms培养基、1.0mg/l 6-ba、0.5mg/l naa、24g/l蔗糖、5.4g/l琼脂。9.根据权利要求1～8任意一项所述的方法，其特征在于，所述诱导培养基的ph为5.4～6.4，优选为5.8。
技术总结
本发明提供了一种马蓝组织培养的方法，包括消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤，建立了马蓝组织培养技术体系，为马蓝组培的进一步工厂化育苗提供技术支撑，并为以后马蓝的遗传转化和品种改良等奠定基础。以后马蓝的遗传转化和品种改良等奠定基础。以后马蓝的遗传转化和品种改良等奠定基础。
技术研发人员：陈洋尔 袁明 胥红 张大燕
受保护的技术使用者：四川农业大学
技术研发日：2023.08.25
技术公布日：2023/10/15