1.本发明涉及一种含芸香科果皮提取物的组合物的制备和应用，具体涉及一种含柠檬果皮提取物的组合物及其制备方法和应用，该含柠檬果皮提取物的组合物不仅具有赋香作用、抗菌防腐作用，而且具有抗氧化、抗过敏、美白、保湿等多重作用，可作为化妆品的多功效原料使用。
背景技术：
2.现有化妆品中一般使用合成香精香料赋香，与天然香精香料相比，合成香精香料的香韵不如天然香精香料的自然、柔和、圆润，且大部分合成香精香料是没有功效性的。多数化妆品都需要添加防腐剂才能赋予化妆品一定的保质期。开发既具有天然香韵、又具有防腐作用、还具有一定功效性的植物提取物用于化妆品中，符合当今化妆品崇尚自然的发展趋势，也更易受到消费者的青睐。
3.柠檬是芸香科柑橘属植物中的第三大品种，也是知名的药食两用水果，其食用和加工过程中产生大量的柠檬果皮等副产物，经现代药理试验证实，柠檬果皮具有抗菌消炎、平喘、祛痰、止咳、镇痛、促进胃肠蠕动和消化液分泌等药理作用。柠檬果皮富含挥发性的萜烯类、生物碱、酚酸类等活性成分，我们发现这些成分不仅具有迷人的芬芳，还具有抗菌性，更具有独特的生物活性，可运用到美容护肤品领域中，在代替合成香精、抗菌防腐的同时，还赋予化妆品特殊的功效性如抗氧化(防皮肤衰老)、抗炎症(舒缓、不易过敏)、抗酪氨酸酶(美白)、保湿等，有鉴于此，本发明提出一种含柠檬果皮提取物的组合物及其制备方法和应用。
技术实现要素：
4.本发明所要解决的技术问题是提供一种具有赋香、抗菌防腐、抗氧化、抗过敏、美白、保湿等作用的含柠檬果皮提取物的组合物及其制备方法和应用。
5.本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种含柠檬果皮提取物的组合物，该组合物由柠檬果皮提取物、1,2-己二醇、1,2-戊二醇、丙二醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油按照(20～60)：(10～20)：(10～20)：(10～20)：(10～20)的质量配比组成，其中，柠檬果皮提取物由柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油按照(20～60)：(20～50)：(20～30)的质量配比组成。
6.本发明含柠檬果皮提取物的组合物的香味具有天然柔和丰满且悠长的特性，柠檬精油具有清新柔和的头香、柠檬浸膏具有丰满圆润的香气、柠檬净油具有悠长持久香气，三者搭配满足了香味的前调、中调、后调且统一的特点。该柠檬果皮提取物不仅具有给化妆品赋香的功效，而且具有抗菌、抗氧化、抗过敏、美白、保湿等功效。
7.本发明组合物中含有的柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油这三种柠檬果皮提取物都具有抗菌防腐作用，与1,2-己二醇、1,2-戊二醇、丙二醇这三种二元醇按照一定比例组合后，增强了抗菌防腐作用，具有给化妆品防腐的功效。
8.本发明组合物中添加聚氧乙烯氢化蓖麻油，有助于各组分之间混合均匀，使得产
品外观均匀不分层，且更易与化妆品的其它原料配伍。
9.我们经过检测发现：
10.1)柠檬精油中主要化合物(相对百分含量》1％)有7种，占总峰面积94.66％，包括d-柠檬烯、β-左旋蒎烯、γ-松油烯等。其中含量最高的组分是d-柠檬烯(58.05％)，具有良好的抑菌、镇咳、祛痰等作用，可用作配制人造橙花、甜花、柠檬、香柠檬油的原料，也可作为一种新鲜的头香香料用于化妆品香精中。β-左旋蒎烯(14.28％)是香料工业和合成其他精细化学品的重要原料，具有广谱抗真菌作用，能抑制很多真菌的生长，可用于收敛皮肤、抗抑郁、抗感冒、缓解胀痛并具有一定的抗癌功效。γ-松油烯(11.98％)是一种单萜，一种口服有效的抗氧化剂，可以直接清除自由基，可用于缓解疼痛，还具有抗真菌和抗锥虫的特性。
11.2)柠檬浸膏中主要化合物(相对百分含量》1％)有16种，占总峰面积92.96％，包括d-柠檬烯、β-红没药烯、α-香柠檬烯等。其中含量最高的是d-柠檬烯(22.95％)。β-红没药烯(19.39％)是既赋香又有保健作用的成分，具有木香、柑橘香、花香、果香、青香和甜润的香脂香气，广泛用于日用化妆品的香精配方中；又是一种很好的抗氧剂，抗痒消炎的功能很好。α-香柠檬烯(占11.82％)，又叫佛手柑内酯，在佛手、八角、香椿中含量较高，有研究表明α-香柠檬烯是天然的有效的抗肿瘤药物，无论是作为食品调味料成分还是天然药物成分都被人们经常食用和使用。
12.3)柠檬净油中主要化合物(相对百分含量》1％)有7种，占总峰面积98.47％，包括d-柠檬烯、γ-松油烯、β-左旋蒎烯等。其中d-柠檬烯占63.79％、γ-松油烯占18.82％、β-左旋蒎烯占5.13％。
13.4)柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油的共同成分有7种，分别为β-左旋蒎烯、月桂烯、d-柠檬烯、γ-松油烯、柠檬醛、芳樟醇和α-松油醇。柠檬醛、芳樟醇和α-松油醇都可作为调香剂、配制柠檬香精等，亦都有抗菌、抗氧化和抗炎等活性。
14.5)三种柠檬果皮提取物中，占比最高的成分均为萜烯类化合物(81.96％～96.64％)。醇类、醛类和酯类等含氧化合物也是柠檬果皮提取物香气成分的主要来源，三种柠檬果皮提取物中的含氧化合物的相对含量依次为：柠檬浸膏(17.8％)》柠檬净油(6.99％)》柠檬精油(3.36％)。
15.上述含柠檬果皮提取物的组合物的制备方法，采用酶解水蒸气蒸馏法制备柠檬精油，采用乙醇浸提法制备柠檬浸膏，采用石油醚浸提醇沉法制备柠檬净油。
16.具体地，柠檬精油的制备过程为：称取100g柠檬果皮于圆底烧瓶中，加入1000～3000ml蒸馏水，再加入柠檬果皮质量1～3％的氯化钠和柠檬果皮质量1～2％的纤维素酶混合物，该纤维素酶混合物由酶活≥1万u/mg的纤维素酶和酶活≥1万u/mg的半纤维素酶以2：1的质量配比组成；此后用柠檬酸调ph值至5～5.5，加热至40～55℃，酶解60～120min，然后升高温度至保持微沸回流提取直至馏出液中无油滴为止，油水分离器分离后，收集油状透明液体，用无水硫酸钠干燥，储存于棕色瓶密封，4℃冷藏备用。制备的柠檬精油为无色透明的液体，保留了天然柔和清新的柠檬香气，挥发性强。
17.具体地，柠檬浸膏的制备过程为：称取100g柠檬果皮，加入柠檬果皮质量2～6％的丙二醇和300～600ml 90％的乙醇，于40～60℃、1～2h浸提2～3次，合并提取液，静置，上清液减压浓缩去除乙醇，膏状物储存于棕色瓶密封，4℃冷藏备用。制备的柠檬浸膏为黄褐色
半膏体，保留了柠檬特有的香气，但香味感觉更丰满圆润。
18.具体地，柠檬净油的制备过程为：称取100g柠檬果皮，加入300～600ml石油醚，于40～60℃、1～2h回流提取2～3次，合并提取液，静置，上清液减压浓缩至膏状后，再将其与无水乙醇以1：(5～10)的体积比混合，于-20℃下放置过夜，取上清液减压浓缩去除溶剂后，储存于棕色瓶密封，4℃冷藏备用。制备的柠檬净油为橙黄色液体，气味较柠檬精油更悠长持久，香气、色泽均优于柠檬浸膏。
19.具体地，含柠檬果皮提取物的组合物的制备过程为：称取柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油按照(20～60)：(20～50)：(20～30)的质量配比混合，得到柠檬果皮提取物；取20～60份柠檬果皮提取物、10～20份聚氧乙烯氢化蓖麻油，充分搅拌均匀后，再加入10～20份1,2-己二醇、10～20份1,2-戊二醇和10～20份丙二醇搅拌均匀即可。
20.上述含柠檬果皮提取物的组合物在化妆品中作为赋香剂、防腐剂、抗菌剂、抗氧化剂、抗过敏剂(皮肤舒缓剂)、抗酪氨酸酶剂(美白剂)以及保湿剂的应用。
21.与现有技术相比，本发明具有如下优点：
22.①
本发明含柠檬果皮提取物将柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油按照一定比例配比，其香味具有天然柔和圆润且持久的特性，柠檬精油具有清新柔和的、柠檬浸膏具有丰满圆润、柠檬净油具有悠长持久，三者搭配满足了香味的前调、中调、后调且统一的特点，具有给化妆品赋香的作用。柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油这三种柠檬果皮提取物都含有丰富的功效性成分，赋予其组合物具有不同程度的抗菌、抗氧化、抗炎症、美白等特性。
23.②
本发明含柠檬果皮提取物的组合物中添加1,2-己二醇、1,2-戊二醇和丙二醇，增强了柠檬果皮提取物的抗菌防腐功能，具有给化妆品抗菌防腐的作用。
24.③
本发明组合物中加入聚氧乙烯氢化蓖麻油，有助于本发明组合物与化妆品中其它成分的配伍性和均匀分散性。
25.④
本发明含柠檬果皮提取物的组合物可作为护肤水、护肤乳、护肤霜等化妆品中的赋香剂、防腐剂、抗菌剂、抗氧化剂、抗过敏剂、抗酪氨酸酶剂以及保湿剂等功效剂。
附图说明
26.图1为实施例中三种柠檬果皮提取物的总离子流色谱图；
27.图2为实施例中三种柠檬果皮提取物的电子鼻响应值变化；
28.图3为实施例中三种柠檬果皮提取物的最大气味响应值的响应曲线。
具体实施方式
29.以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
30.一、本发明含柠檬果皮提取物的组合物中的柠檬果皮提取物由柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油按照(20～60)：(20～50)：(20～30)的质量配比组成。
31.以下为柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油这三种柠檬果皮提取物的制备及评价测试结果：
32.(1)三种柠檬果皮提取物的制备及感官评价
33.新鲜柠檬果皮洗净，去除白色内层后，于40℃干燥1～3h后，粉碎过8～16目孔径筛网，塑料袋密封保存，备用。
34.柠檬精油的制备：称取100g柠檬果皮于圆底烧瓶中，加入1000～3000ml蒸馏水，再加入柠檬果皮质量1～3％的氯化钠和柠檬果皮质量1～2％的纤维素酶混合物，该纤维素酶混合物由酶活≥1万u/mg的纤维素酶和酶活≥1万u/mg的半纤维素酶以2：1的质量配比组成；此后用柠檬酸调ph值至5～5.5，加热至40～55℃，酶解60～120min，然后升高温度至保持微沸回流提取直至馏出液中无油滴为止，油水分离器分离后，收集油状透明液体，用无水硫酸钠干燥，储存于棕色瓶密封，4℃冷藏备用。
35.柠檬浸膏的制备：称取100g柠檬果皮，加入柠檬果皮质量2～6％的丙二醇和300～600ml90％的乙醇，于40～60℃、1～2h浸提2～3次，合并提取液，静置，上清液减压浓缩去除乙醇，黄褐色膏状物储存于棕色瓶密封，4℃冷藏备用。
36.柠檬净油的制备：称取100g柠檬果皮，加入300～600ml石油醚，于40～60℃、1～2h回流提取2～3次，合并提取液，静置，上清液减压浓缩至膏状后，再将其与无水乙醇以1：(5～10)的体积比混合，于-20℃下放置过夜，取上清液减压浓缩去除溶剂后，橙黄色液体储存于棕色瓶密封，4℃冷藏备用。
37.制备的三种柠檬果皮提取物的感官品质比较见表1。
38.表1三种柠檬果皮提取物的感官品质比较
[0039][0040]
柠檬精油为无色透明的液体，保留了清新的柠檬香气，挥发性强；柠檬浸膏为黄褐色半膏体，较完全地保持了柠檬香气的天然性；柠檬净油为橙黄色液体，气味较柠檬精油更持久厚重，香气、色泽均优于柠檬浸膏。
[0041]
(2)三种柠檬果皮提取物所含成分的gc/ms测试
[0042]
gc条件：毛细管色谱柱为hp-5ms弹性石英毛细管柱(30m
×
0.25mm
×
0.25μm)；载气为纯度＞99.999％的氦气；采用手动进样，分流比为200:1；进样口温度为220℃；升温程序为柱温初始温度50℃保持3min，以2℃/min升至110℃保持10min，以2℃/min升至140℃保持2min，以10℃/min升至250℃，保持5min(共运行84min)。
[0043]
质谱条件：电离方式为电子轰击电离源(ei)；电子能量为70ev；传输线温度270℃；离子源温度为230℃；溶剂延迟2min；扫描范围35～550u；扫描方式为全扫描。
[0044]
运用nist ms谱库对图谱进行解析，确定各挥发性物质的名称，并采用面积归一化法来计算各成分的相对含量。
[0045]
三种柠檬果皮提取物的总离子流色谱图见图1。柠檬精油共检出22个色谱峰，柠檬浸膏共检出39个色谱峰，柠檬净油共检出9个色谱峰。
[0046]
三种柠檬果皮提取物的化学成分及相对百分含量见表2。
[0047]
表2三种柠檬果皮提取物的化学成分及相对百分含量
[0048][0049][0050]
注：
“‑”
表示含量＜0.05或未检出。
[0051]
柠檬精油中检出22个成分，相对百分含量》1％的化合物有7种，占总峰面积94.66％，其中含量最高的组分是d-柠檬烯(58.05％)，具有良好的抑菌、镇咳、祛痰、缓解神经紧张、止痛、排毒养颜作用，可用作配制人造橙花、甜花、柠檬、香柠檬油的原料，也可作为一种新鲜的头香香料用于化妆品香精中。β-左旋蒎烯(14.28％)具有树脂和松脂香气，是香料工业和合成其他精细化学品的重要原料，具有广谱抗真菌作用，能抑制很多真菌的生长，可用于收敛皮肤、抗抑郁、抗感冒、缓解胀痛并具有一定的抗癌功效。γ-松油烯(11.98％)是一种单萜，具有柑橘和柠檬香气，可用于配制人造柠檬和薄荷香精油；γ-松油烯也是一种口服有效的抗氧化剂，可以直接清除自由基，可用于缓解疼痛，具有抗真菌和抗锥虫的特性。
[0052]
柠檬浸膏中检出39个成分，相对百分含量》1％的化合物有16种，占总峰面积92.96％，其中含量最高的是d-柠檬烯占22.95％。β-红没药烯(19.39％)是既赋香又有保健作用的成分，具有木香、柑橘香、花香、果香、青香和甜润的香脂香气，广泛于日用化妆品的香精配方中，又是一种很好的抗氧剂，抗痒消炎的功能很好。α-香柠檬烯(占11.82％)，又叫佛手柑内酯，在佛手、八角、香椿中含量较高，有研究表明香柠檬烯是天然的有效的抗肿瘤药物，无论是作为食品调味料成分还是天然药物成分都被人们经常食用和使用。
[0053]
柠檬净油中相对百分含量》1％有7种，占总峰面积98.47％，其中d-柠檬烯占63.79％，γ-松油烯占18.82％，β-左旋蒎烯占5.13％。
[0054]
三种柠檬果皮提取物的成分类别及占比见表3。
[0055]
表3三种柠檬果皮提取物的成分类别及占比(％)
[0056][0057][0058]
三种柠檬果皮提取物中，占比最高的成分均为萜烯类化合物(81.96％～96.64％)。醇类、醛类和酯类等含氧化合物也是柠檬果皮提取物香气成分的主要来源，三种柠檬果皮提取物中的含氧化合物相对含量依次为柠檬浸膏(17.64％)》柠檬净油(6.99％)》柠檬精油(3.36％)。
[0059]
柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油的共同成分有7种，分别为β-左旋蒎烯、月桂烯、d-柠檬烯、γ-松油烯、柠檬醛、芳樟醇和α-松油醇。柠檬醛、芳樟醇和α-松油醇都可作为调香剂、配制柠檬香精和制造柑橘类香料等，亦有较强的抗菌、抗氧化和抗炎等活性。不同提取工艺所得的柠檬果皮提取物所含成分具有一定的相似性又有差异性，这就导致三种柠檬果皮提取物在香味、功能等方面具有协调性，又具有互补性。
[0060]
三种柠檬果皮提取物的总黄酮、总多酚的含量比较见表4。黄酮、多酚的功效是多方面的，属于很强的抗氧剂，可有效清除体内的自由基，阻止细胞的退化、衰老，可以抑制炎性生物酶的渗出，增进伤口愈合和止痛，可以用于各类敏感症。
[0061]
表4三种柠檬果皮提取物的总黄酮总多酚的含量比较(n＝3)
[0062][0063]
(3)三种柠檬果皮提取物气味的电子鼻测试分析
[0064]
精密移取三种柠檬果皮提取物2ml于10ml的顶空瓶中平衡1min。采用顶空吸气法，室温，用pen3型电子鼻检测。测定条件：传感器自清洗时间为150s、传感器归零时间为5s、样品准备时间为5s、信号采集时间为300s。运用pen3型传感器配套的winmuster软件对数据进行分析。三种柠檬果皮提取物的电子鼻响应值变化见图2。
[0065]
由图2可知，十个传感元件对样品气味的反应强度均有差异，响应值主要集中在s2、s7及s9探头上。其中精油和净油s7响应值最高，而浸膏s2响应值最高。由表2～3可知，萜烯类化合物在三种柠檬果皮提取物中均为主要成分，在精油、浸膏和净油中分别占96.64％、81.96％、93.01％，因此精油和净油的s7响应值相对来说较高。而浸膏是唯一含有异硫氰类化合物的，虽其相对含量仅为0.22％，而其s2的响应值为最高，原因是异硫氰酸苯酯有强烈刺激性气味，即便是极低浓度也可被s2探针所捕捉。
[0066]
根据最大响应值绘制其响应曲线图3，找出三种柠檬果皮提取物样品气味的峰值，并测定到达峰值100s后其响应值的变化，见表5。
[0067]
表5三种柠檬果皮提取物的气味响应峰值及其变化
[0068][0069]
综合图3和表5，根据最大响应峰值判断香味浓郁：柠檬精油(43.4134)＞柠檬浸膏(20.3461)＞柠檬净油(16.6896)，这是因为浸膏、净油中除了萜类、芳香成分外，还含有植物蜡、色素等，样品粘度大，香味成分较难突破屏障，是整体响应值较低的主要原因。根据峰值后相同时间段内峰值与对应的g/g0值间的差值判断留香效果，选取三个时间段分别为峰值后60s、100s及140s，得到香味的持久性是：柠檬净油＞柠檬精油＞柠檬浸膏，表明不同提取方法得到的柠檬果皮提取物，成分种类及含量的差异都会影响香气的浓烈、丰满、以及持久性。
[0070]
由此可见，柠檬精油的香气主要富集在前段，丰富性稍差；柠檬浸膏的香气丰满醇厚，气味出现在中后段；柠檬净油的香味不够浓郁但持久性好。柠檬浸膏能弥补和衔接精油和净油的中间香气，三者搭配香气协调、层次多样、且可增强香气的持久性。
[0071]
(4)三种柠檬果皮提取物的体外抗氧化活性测定
[0072]
dpph自由基：向试管中依此加入1ml不同浓度的样品液、3ml 1mmol/l dpph溶液和1ml去离子水至总体积5ml作为待测组，充分摇匀后于常温避光反应30min，以样液溶剂调
零，测定517nm处的吸光度a1。以样液溶剂代替样液作为空白组，测得a0。以无水乙醇代替dpph溶液作为本底组，测得a2。以维生素c作阳性对照。按下例公式(1)计算，结果见表6。
[0073]
abts自由基：向试管中依此加入1ml不同浓度样品液、3ml abts工作液(a
734nm
为0.7
±
0.02)和1ml去离子水至总体积5ml作为待测组，充分摇匀后于常温避光反应30min，以样液溶剂作为调零，测定其在734nm处的吸光度a1。以样液溶剂代替样液作为空白组，测得a0。以无水乙醇代替abts溶液作为本底组，测得a2。以维生素c作阳性对照。按下例公式(1)计算，计算结果见表7。
[0074][0075]
表6三种柠檬果皮提取物对dpph自由基的清除率及ic
50
(n＝3)
[0076][0077]
综合表6可知，三种柠檬果皮提取物对dpph自由基的清除能力均随浓度的增加而增强。对dpph自由基的清除率是：柠檬浸膏＞柠檬净油＞柠檬精油。效果较佳的柠檬浸膏在8mg/ml时对dpph的清除率高达92.44
±
1.99％。
[0078]
表7三种柠檬果皮提取物对abts自由基的清除率及ic
50
(n＝3)
[0079][0080]
综合表7可知，在试验浓度范围内，三种柠檬果皮提取物对abts自由基的清除能力均随浓度的增加而增强。对abts自由基的清除率是：柠檬净油＞柠檬浸膏＞柠檬精油。柠檬净油在0.7mg/ml时对abts自由基的清除率可达91.80
±
2.46％。
[0081]
三种柠檬果皮提取物对自由基清除效果有差异，这与提取物中总黄酮、总多酚含量多少有关系。从表5可知柠檬浸膏和净油中总黄酮和总多酚的量多于柠檬精油。黄酮、多酚物质有较好的抗自由基效果，对二种自由基的清除规律总体与三种提取物中总黄酮、总多酚含量变化规律吻合。
[0082]
(5)三种柠檬果皮提取物的体外抗炎活性测定
[0083]
采用白蛋白抑制试验评价。向试管中依此加入0.4ml新鲜蛋清稀释液和3.1ml磷酸盐缓冲液(ph6.8)，充分摇匀后加入1.5ml不同浓度样液至总体积5ml作为待测组，于37℃水浴孵化15min后，立即置于70℃水浴加热10min，冷却，以去离子水作为调零管，测定其在660nm处的吸光度a1。以pbs缓冲液代替样液作为空白组，测得a0。以pbs缓冲液代替蛋清稀释液作为本底组，测得a2。以布洛芬(标准药物)作阳性对照。按公式(2)计算，结果见表8。
[0084][0085]
表8三种柠檬果皮提取物对白蛋白的抑制率(％,n＝3)
[0086][0087]
综合表8可知，在试验浓度5至200μg/ml范围内，三种柠檬果皮提取物和阳性对照布洛芬均能不同程度地保护白蛋白免受热诱导的损伤变性且呈浓度依赖性，其抑制率是：柠檬净油＞柠檬浸膏＞柠檬精油。效果较佳的柠檬净油(200μg/ml)显示出72.69
±
1.13％
的抑制率，可与布洛芬相媲美。已有研究证明柠檬烯、芳樟醇和α-蒎烯等具有抗炎作用，也有研究表明β-红没药烯具有消炎的功能。三者相比，柠檬净油具有最强的抗炎效果。
[0088]
(6)三种柠檬果皮提取物的体外抗酪氨酸酶活性测定
[0089]
按表9从上往下的顺序依次加入各试剂，充分摇匀后于37℃水浴孵化10min，立即加入酪氨酸溶液于37℃避光保温30min，冷却，以去离子水调零，测定各组样品的a
475nm
。以熊果苷作阳性对照，对酪氨酸酶抑制率按公式(3)计算，结果见表10。
[0090][0091]
表9对酪氨酸酶抑制率测定的反应液组成
[0092][0093]
表10三种柠檬果皮提取物对酪氨酸酶的抑制率及ic
50
(n＝3)
[0094][0095]
从表10可知，三种柠檬果皮提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用均随浓度的增大而增强，对酪氨酸酶的抑制率大小是：柠檬精油＞柠檬浸膏＞柠檬净油。柠檬精油在20mg/ml
时，其抑制率可达93.82
±
1.06％，远超过阳性对照熊果苷的抑制率。且三种柠檬果皮提取物的ic
50
值均低于熊果苷ic
50
值29.40mg/ml，说明其抗酪氨酸酶的效果均优于熊果苷。柠檬果皮中富含黄酮、多酚等多种生物活性物质，由于它们与酪氨酸酶的底物结构相似，能作为底物类似物结合酪氨酸酶，从而起到抑制黑色素生成的作用；柠檬醛、乙酸橙花酯、蒎烯等物质也是抑制酪氨酸酶活性的主要贡献者；不同化合物的协同作用使得提取物对酪氨酸酶具有不同程度的抑制效果。
[0096]
(7)三种柠檬果皮提取物的抗菌性测定
[0097]
待测菌种制备：菌种使用mh培养基活化，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在37℃、白色念珠菌在28℃培养至对数生长期，菌液5000r/min离心10min，收集沉淀，用0.9％无菌生理盐水洗涤沉淀2次，用mh培养基重悬细菌并调整菌液浓度为1
×
108cfu/ml，为待测菌液。
[0098]
样品溶液配制：精密称取三种柠檬果皮提取物各0.100g，各用1ml dmso溶解得到浓度为100mg/ml的样品母液。
[0099]
抑菌率测定：实验分为空白组、溶剂空白组和实验组，实验组包括柠檬精油组、浸膏组、净油组。取无菌96孔板，空白组加入170μl的mh培养基和30μl待测菌液；溶剂空白组加入200μl含不同浓度样品的mh培养基；实验组加入170μl含样品的mh培养基和30μl待测菌液。置于培养箱中培养18h后，用酶标仪在600nm处测吸光值。每个样品三个复孔。
[0100]
抑菌率按公式(4)计算，结果见表11。
[0101][0102]
表11三种柠檬果皮提取物对大肠杆菌、金葡菌及白色念珠菌的抑菌率(％，n＝3)
[0103][0104]
比较表11的三种柠檬果皮提取物的抗菌性能，发现同浓度的柠檬精油的抗菌能力强于柠檬浸膏与柠檬净油，其中对大肠杆菌比对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌更敏感，浓度＞12.5mg/ml时，对三种菌的抑菌率均＞90％以上。在浓度为50mg/ml时，三种柠檬果皮提取物对三种菌的抑菌率达到93％以上(柠檬浸膏对金黄色葡萄球菌除外)。
[0105]
二、本发明组合物中所含的柠檬果皮提取物由柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油按照(20～60)：(20～50)：(20～30)的质量配比组成。基于三种柠檬果皮提取物在香气、抗自由
基、抗炎症、抗酪氨酸酶以及抗菌方面各有优势又有差异，具体是：
[0106]
(1)香气，三者的香气在浓郁度、丰满度、持久性各有特色，可以互补；
[0107]
(2)抗dpph能力：柠檬浸膏＞柠檬净油＞柠檬精油；
[0108]
(3)抗abts能力：柠檬净油＞柠檬浸膏＞柠檬精油；
[0109]
(4)抗炎症效果：柠檬净油＞柠檬浸膏＞柠檬精油；
[0110]
(5)抗酪氨酸酶性能：柠檬精油＞柠檬浸膏＞柠檬净油；
[0111]
(6)抗菌性：柠檬精油优于浸膏与净油。
[0112]
为此，本发明将三种柠檬果皮提取物按照一定比例配制成混合物，以达到互补增强效果。
[0113]
实施例1：称取柠檬精油50份、柠檬浸膏20份、柠檬净油30份，混合均匀，得到柠檬果皮提取物，其色泽状态为黄色液态，其香味特征是纯正清新、丰满悠长的柠檬特有香气。按照前述的方法进行抗自由基、抗酪氨酸酶、抗菌、抗炎症实验，结果如表12。
[0114]
表12柠檬果皮提取物对相关指标的抑制率(％)测试结果(n＝3)
[0115][0116]
可见，将三种柠檬果皮提取物按一定比例混合后，其香气、功效有互补增强效果，更有利于作为化妆品的赋香剂和功效剂。
[0117]
三、本发明含柠檬果皮提取物的组合物由柠檬果皮提取物、1,2-己二醇、1,2-戊二醇、丙二醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油(如peg-40氢化蓖麻油)按照(20～60)：(10～20)：(10～20)：(10～20)：(10～20)的质量配比组成。其中柠檬果皮提取物由柠檬精油、柠檬浸膏、柠檬净油按照(20～60)：(20～50)：(20～30)的质量配比组成。本发明含柠檬果皮提取物的组合物可作为护肤水、护肤乳、护肤霜等化妆品中的赋香剂、防腐剂、抗菌剂、抗氧化剂、抗过敏剂、美白剂、保湿剂、抗酪氨酸酶以及皮肤舒缓剂等功效原料添加应用。
[0118]
(1)实施例2和对比例：柔颜乳霜的配方与制备
[0119]
表12乳霜产品的配方
[0120][0121]
实施例2的制备：将a组分依次投料至乳化锅中，加热搅拌升温到80℃；将b组分混合并加热至80℃后，将b组分倒入到a组分中，保温均质搅拌15min。继续搅拌降温到45～50℃，加入c组分，继续搅拌15min后出料。
[0122]
对比例的制备：将a组分依次投料至乳化锅中，加热搅拌升温到80℃；将b组分与d组分混合后加热至80℃，将b d组分倒入到a组分中，保温均质搅拌15min。继续搅拌降温到45～50℃，加入e组分，混匀后出料。
[0123]
(2)实施例2和对比例：依据《化妆品安全技术规范》(2015年版，国家药品监督管理局2019年第40号通告)进行乳霜的感官、涂抹性、稳定性和微生物检验比较，检验结果见表13和表14。
[0124]
表13乳霜产品的感官指标与稳定性
[0125][0126][0127]
将实施例2和对比例的乳霜产品50g置于瓶中，盖好密闭，放置40℃烘箱中10天后，取样进行微生物检测结果如下：
[0128]
表14乳霜产品的微生物检验结果
[0129]